二氫葉酸還原酶-胸苷合酶的提取及抑制劑篩選研究.pdf

1、二氫葉酸還原酶和胸苷合酶是DNA生物合成中的關鍵酶。因此，這兩種酶被廣泛用作包括抗癌、抗菌、抗真菌、抗病毒、抗瘧藥在內的許多藥物篩選的靶標分子，對其作進一步研究具有重要的現(xiàn)實意義。本文介紹了二氫葉酸還原酶和胸苷合酶的提取，以及高效毛細管電泳法在二氫葉酸還原酶反應動力學研究中的應用，包括酶反應動力學參數(shù)的測定及抑制動力學研究。 利用建立的二氫葉酸還原酶抑制劑的高效毛細管電泳法篩選模型，研究了人參皂苷Rg3、三七總皂苷、黃芩苷、木樨

2、草素、表兒茶素、紫杉醇等6種從植物中提取得到標準品對二氫葉酸還原酶的抑制作用。研究結果表明，表兒茶素、木樨草素、紫杉醇對二氫葉酸還原酶有明顯的抑制作用。 利用親和層析法從雞肝中提取得到了二氫葉酸還原酶，并利用紫外分光光度法測定了氨甲喋呤和表沒食子兒茶素沒食子酸酯對提取得到的雞肝二氫葉酸還原酶的抑制作用。 建立了高效毛細管電泳法對雞肝二氫葉酸還原酶活力的測定方法及其抑制劑的篩選模型。通過對產物NADP峰面積的定量測定，計算

3、出雞肝二氫葉酸還原酶的米氏常數(shù)。將已知的氨甲喋呤抑制劑作用于本文所建立的雞肝二氫葉酸還原酶體系，發(fā)現(xiàn)測得抑制劑的半數(shù)抑制濃度與文獻值相符，證明該體系可用于二氫葉酸還原酶抑制劑的篩選。 胸苷合酶是胸苷酸生物合成中的關鍵酶，在快速增殖的細胞中抑制胸苷合酶的活性，可使DNA合成受阻，導致DNA鏈碎裂，引起細胞死亡，因此被廣泛用作抗癌和抗感染病藥物篩選的靶標分子，對其作進一步研究具有重要的現(xiàn)實意義。由于沒有商品胸苷合酶出售，為了進行胸苷