血小板型十二脂氧合酶抑制劑在胃癌細(xì)胞增殖與遷移中的作用研究.pdf

1、目的:探討血小板型12-脂氧合酶（platelet type12-lipoxygenase，p12-LOX）選擇性抑制劑黃芩素(baicalein，BAI)對胃癌MKN-28細(xì)胞增殖和遷移的影響及其機(jī)制。
　　方法:應(yīng)用RT-PCR檢測胃癌MKN-28細(xì)胞和正常胃黏膜GES-1細(xì)胞中p12-LOX的mRNA表達(dá);不同濃度的BAI處理MKN-28細(xì)胞后，應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞的增殖情況;劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測

2、細(xì)胞遷移能力;Hoechst染色觀察細(xì)胞凋亡;免疫熒光染色法檢測E-cadherin和Snail蛋白的表達(dá);Western blot實(shí)驗(yàn)檢測p12-LOX和Ezrin蛋白、凋亡相關(guān)蛋白、EMT標(biāo)志物蛋白及TGF-β/Smad和MAPK/ERK信號通路的相關(guān)蛋白表達(dá)的影響;流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果:1.胃癌MKN-28細(xì)胞中p12-LOX和Ezrin基因表達(dá)水平明顯高于正常胃粘膜GES-1細(xì)胞（P＜0.01

3、）;2.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，BAI顯著抑制MKN-28細(xì)胞的增殖，并呈時(shí)間和劑量依懶性（P＜0.05），但對GES-1細(xì)胞增殖能力的影響不明顯;3.流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，10μMBAI處理MKN-28細(xì)胞，可將細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，并誘導(dǎo)發(fā)生細(xì)胞凋亡(P＜0.05);Hoechst33342染色及流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，BAI可誘導(dǎo)MKN-28細(xì)胞凋亡（P＜0.01）;4.劃痕愈合實(shí)驗(yàn)及Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，B

4、AI處理可使MKN-28細(xì)胞的遷移能力明顯下降(P＜0.05);免疫熒光染色結(jié)果亦表明，BAI處理可上調(diào)MKN-28細(xì)胞的E-cadherin蛋白表達(dá)(P＜0.05)，下調(diào)Snail蛋白表達(dá)（P＜0.01）;5.Western blot結(jié)果顯示，BAI處理MKN-28細(xì)胞顯著抑制p12-LOX、Ezrin、GSK-3β、Vimentin、Snail、p-MEKK1，p-Erk1/2、TGF-β1和p-Smad3蛋白表達(dá)水平(P＜0.01