脂肪酸合成酶（FASE）及其抑制劑在胃腺癌中的作用.pdf

1、前言:脂肪酸合成酶(fattyacidsynthase，F(xiàn)ASE)是脂肪酸生物合成過程中將小分子碳單位聚合成長鏈內(nèi)源性脂肪酸的關(guān)鍵酶。在正常情況下僅表達(dá)于肝臟、脂肪組織和泌乳期乳腺等組織中，但大量的研究發(fā)現(xiàn)在許多腫瘤組織和細(xì)胞中如乳腺癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌、卵巢癌等都存在脂肪酸合成酶(FASE)的過度表達(dá)，且FASE的過度表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲以及診斷和預(yù)后密切相關(guān)。同時研究發(fā)現(xiàn)：脂肪酸合成酶抑制劑淺藍(lán)菌素(Cerulenin

2、)可以特異性的抑制FASE的活性，不可逆抑制內(nèi)源性脂肪酸的合成，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的發(fā)生。目前關(guān)于脂肪酸合成酶及其抑制劑在消化道腫瘤方面的研究較少，因此本課題主要旨在FASE在胃癌組織和細(xì)胞中表達(dá)情況以及FASE抑制劑Cerulenin對于胃癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性等諸多方面開展了如下四個部分的研究： 第一部分:三種胃腺癌細(xì)胞系中脂肪酸合成酶的表達(dá)及其意義 目的：研究三種不同分化的胃癌細(xì)胞中脂肪酸合成酶(

3、FASE)的表達(dá)情況及其可能的臨床意義。 方法：用RT-PCR和Westernblot技術(shù)檢測三種不同分化程度的人胃腺癌細(xì)胞系(MKN45、SGC7901和MKN28)中FASE的mRNA和蛋白的表達(dá)水平，并分析其與三種不同分化胃癌細(xì)胞的關(guān)系。 結(jié)果：三種不同分化程度的人胃腺癌細(xì)胞系MKN45、SGC7901和MKN28均可見FASE的mRNA和蛋白的表達(dá)；相對于低分化MKN45，以高、中分化的MKN28和SGC7901

4、表達(dá)量較高(p＜0.05)。 結(jié)論：FASE高表達(dá)于胃癌細(xì)胞中，尤其主要發(fā)生在胃癌的早期階段，與胃癌的分化程度密切相關(guān)。 第二部分:胃腺癌組織中FASE和相關(guān)蛋白的表達(dá)及其意義 目的：檢測胃癌中脂肪酸合成酶(FASE)和E-鈣黏素(E-cadherin)的表達(dá)，并探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法：采用免疫組織化學(xué)S-P技術(shù)，對胃癌及癌旁正常組織各121例手術(shù)標(biāo)本中FASE、E-鈣黏素的表達(dá)進(jìn)行檢測，并

5、分析兩種蛋白與臨床病理特征之間的關(guān)系。 結(jié)果：FASE在癌旁組織中的陽性表達(dá)率(11.3％)明顯低于胃癌組織(72.6％，P＜0.01)，而E-鈣黏素在癌旁組織的陽性表達(dá)率(93.6％)則明顯高于胃癌組織(43.3％，P＜0.01)。FASE表達(dá)與患者年齡、性別、Lauren's分類和分化程度相關(guān)(P＜0.05)，與腫瘤大小、Borrmann's分類、侵襲深度、轉(zhuǎn)移情況、TNM分期及生長方式無關(guān)(P＞0.05)；FASE陽性和陰

6、性患者的生存率雖有不同但無顯著性差異(P=0.349)。E-鈣黏素表達(dá)與轉(zhuǎn)移情況、分化程度、Lauren's分類相關(guān)(P＜0.05)；與性別、年齡、腫瘤大小、Borrmann's分類、侵襲深度及TNM分期等均無關(guān)(P＞0.05)。胃癌組織中E-鈣黏素表達(dá)缺失與FASE高表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05)。 結(jié)論：FASE高表達(dá)與E-鈣黏素表達(dá)缺失均與胃癌分化程度相關(guān)，兩者聯(lián)合檢測有可能作為評估胃癌惡性程度的生物學(xué)指標(biāo)，為臨床診斷及治療

7、該病提供重要依據(jù)。 第三部分:脂肪酸合成酶抑制劑抑制人胃癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡 目的：研究脂肪酸合成酶(FASE)抑制劑淺藍(lán)菌素(cerulenin)對人胃癌細(xì)胞株增殖的影響及誘導(dǎo)凋亡的作用。 方法：MTF法觀察終濃度2.5，5，10，20和40mg/Lcerulenin分別作用于無血清培養(yǎng)及有血清培養(yǎng)的MKN28，SGC7901和MKN45細(xì)胞株24h后，檢測其對細(xì)胞增殖的抑制作用。40mg/Lcerulenin

8、作用于無血清培養(yǎng)的三種細(xì)胞12h后，用流式細(xì)胞儀(FCM)、DNA凝膠電泳對其凋亡和細(xì)胞周期進(jìn)行檢測。 結(jié)果：Cerulenin對人MKN28，SGC7901，MKN45細(xì)胞株的增殖有顯著的抑制作用并呈劑量依賴性，對無血清組的培養(yǎng)細(xì)胞株的抑制作用高于有血清組。 結(jié)論：Cerulenin顯著地阻遏人胃癌細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞凋亡，有可能成為胃癌治療的新靶點。 第四部分:線粒體凋亡通路在FASE抑制劑誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞

9、凋亡中的作用 目的：研究Caspase-3和Caspase-9在FASE抑制劑Cerulenin誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞凋亡過程中的作用，與內(nèi)源性線粒體凋亡通路的關(guān)系。 方法：以40mg/Lcerulenin分別作用于加caspase-3抑制劑、caspase-9抑制劑、聯(lián)合Caspase-3和Caspase-9抑制劑以及未加caspases抑制劑培養(yǎng)的MKN45細(xì)胞，培養(yǎng)24小時后，用流式細(xì)胞儀分別檢測細(xì)胞凋亡率。 結(jié)果

10、：相對于對照組(凋亡率為3.05％)，Cerulenin組可以顯著誘導(dǎo)MKN45細(xì)胞的凋亡(凋亡率為35.39％，P＜0.01)；而Caspase-3抑制劑和Caspase-9抑制劑均可明顯抑制cerulenin誘導(dǎo)MKN45細(xì)胞的凋亡，凋亡率分別為22.16％、29.36％。特別是在聯(lián)合應(yīng)用Caspase-3和Caspase-9抑制劑后，可極大地抑制cerulenin誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(凋亡率為13.69％，P＜0.05)。 結(jié)論