乳腺癌中脂肪酸合成酶相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的研究.pdf

1、目的： 1．用RFDD-PCR、RT-PCR、免疫組織化學(xué)染色和Western blot等方法，檢測FAS以及與FAS過度表達(dá)可能相關(guān)的ErbB家族、PI-3K家族和FABP家族不同成員在癌旁正常組織、乳腺纖維腺瘤和乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的表達(dá)差異。 2．分析各成員與FAS的相互關(guān)系，篩選出與FAS過度表達(dá)相關(guān)的信號分子。 3．探討FAS在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌發(fā)生發(fā)展中可能的作用機(jī)制。 4．為探詢?nèi)橄俳櫺詫?dǎo)管癌的

2、分子標(biāo)志和治療的靶基因提供理論依據(jù)。 方法： 1．在Qbio-gene Inc．MP Biomedicals，Inc．公司提供的數(shù)據(jù)庫(http://www．qbio-gene．com/displayfit/)中，逐一查找FAS、ErbBs、PI-3Ks和FABPs基因家族所在的表達(dá)窗以及基因片段的長度。用RFDD-PCR的方法在相應(yīng)表達(dá)窗對目的片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增。 2．應(yīng)用高電壓垂直電泳系統(tǒng)，以7％尿素變性聚丙

3、烯酰胺凝膠電泳分離表達(dá)基因片段，Yyphoon9200成像系統(tǒng)和圖像分析軟件ImageQuant TL，Image Tool，F(xiàn)ragment．Analysis軟件對凝膠圖象進(jìn)行分析，比較目的基因片段在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織和癌旁正常組織表達(dá)的差異。 3．因未能在數(shù)據(jù)庫中獲得FAS、FABPs基因的相關(guān)信息，故用半定量RT-PCR方法檢測這些基因的mRNA在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌和癌旁正常組織的表達(dá)差異。同時(shí)，用RT-PCR

4、進(jìn)一步檢測ErbBs和PI-3Ks各成員在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌和癌旁正常組織的表達(dá)差異，并檢測ErbBs、PI-3Ks與FAS表達(dá)的相關(guān)性，篩選出其表達(dá)與FAS表達(dá)相關(guān)的基因。 4.用免疫組織化學(xué)染色方法檢測FAS及其相關(guān)蛋白ErbB-1、ErbB-2、E-FABP、H-FABP、L-FABP和VEGF等在乳腺纖維腺瘤和乳腺浸性導(dǎo)管癌組織的時(shí)空表達(dá)變化。 5.用Western blot進(jìn)行定量分析，比較以上目的蛋白在不同乳腺

5、組織以及乳腺浸潤性導(dǎo)管癌不同組織學(xué)級數(shù)的表達(dá)量的變化。 6.用T檢驗(yàn)檢測組間的表達(dá)差異。根據(jù)免疫組織化學(xué)結(jié)果，用x<'2>檢驗(yàn)檢測FAS與ErbB-1、ErbB-2、E-FABP、L-FABP和VEGF蛋白表達(dá)的相關(guān)性。用Pearson相關(guān)性系數(shù)檢驗(yàn)兩組變量間的相關(guān)性。P<0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.ErbB-1、ErbB-2、ErbB-3 mRNA在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的表達(dá)較癌旁正常組織明顯升高(P

6、<0.05)。ErbB-4在兩組的表達(dá)無顯著性差異(P>05)。ErbB-1和ErbB-2在FAS陽性組的表達(dá)較陰性組明顯升高(P<0.05)。ErbB-1和ErbB-2 mRNA的表達(dá)與FAS有明顯相關(guān)性(P<0.05)。 2.PIK3CA、PIK3CB、PIK3C2A、PIK3C2B、PIK3CG mRNA在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的表達(dá)較癌旁正常組織明顯上調(diào)(P<0.05)。PIK3R1、PIK3R3、PIK3R4在導(dǎo)管癌組織表達(dá)

7、明顯下調(diào)(P<0.05)。PIK3CA、PIK3CB的表達(dá)在FAS陽性組的表達(dá)較陰性組明顯上調(diào)(P<0.05)。PIK3CA、PIK3CB與FAS mRNA的表達(dá)有明顯相關(guān)性(P<0.05)。 3.A-FABP、B-FABP、I-FABP、G-FABP在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的表達(dá)較乳腺纖維腺瘤無顯著性差異(P>0.05)。E-FABP、H-FABP和L-FABP在導(dǎo)管癌較纖維腺瘤表達(dá)明顯上調(diào)(P<05)。 4.FAS、E-F

8、ABP、H-FABP、L-FABP與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織學(xué)級數(shù)相關(guān)(P<0.05)，但是與患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌孕激素受體等其它臨床病理學(xué)特征無關(guān)(P>0.05)。 5.FAS、E-FABP和H-FABP的表達(dá)在Ⅲ級導(dǎo)管癌的表達(dá)較Ⅰ、Ⅱ級明顯下調(diào)(P<0.05)。E-FABP、H-FABP與FAS的表達(dá)具明顯相關(guān)性(P<0.05)。 6.L-FABP、VEGF在Ⅲ級導(dǎo)管癌的表達(dá)較Ⅰ、Ⅱ級明顯上調(diào)(P<0.05)。L-F

9、ABP、VEGF的表達(dá)有明顯相關(guān)性(P<0.05)，但它們的表達(dá)與FAS無關(guān)(P>0.05)。 結(jié)論： 1.FAS、ErbB-1、ErbB-2和ErbB-3的過度表達(dá)可能與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。ErbB-1、ErbB-2可能作為FAS的上游分子，調(diào)節(jié)FAS的表達(dá)。 2.PIK3CA、PIK3CB、PIK3C2A、PIK3C2B、PIK3CG的過度擴(kuò)增以及PIK3R1、PIK3R3、PIK3R4表達(dá)的下

10、調(diào)可能與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌細(xì)胞的增殖、存活、惡化、黏附和轉(zhuǎn)移有關(guān)。 3.PIK3CA、PIK3CB與ErbB-1、ErbB-2和FAS的密切關(guān)系提示，活化的PIK3CA、PIK3CB可能通過與激活的受體ErbB-1、ErbB-2結(jié)合以及PI-3K底物磷酸化，將信號向下游傳導(dǎo)，導(dǎo)致FAS的過度表達(dá)，PIK3CA、PIK3CB可能是連接ErbB-1、ErbB-2和FAS進(jìn)行分子對話的橋梁。 4.在Ⅰ、Ⅱ乳腺浸潤性導(dǎo)管癌，F(xiàn)AS