脂肪細(xì)胞調(diào)控乳腺癌免疫逃逸的分子機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：目前，乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一，占女性惡性腫瘤的40％。轉(zhuǎn)移是造成乳腺癌患者死亡的重要原因。乳腺腫瘤會侵犯并且會破壞女性乳房處的正常組織然后通過淋巴管、血道，引起局部或全身復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。此外，乳腺部位的脂肪組織是其主要組成部分之一，以前脂肪組織只是簡單的理解成為一種儲存能量的組織,但最近幾年對脂肪細(xì)胞以及其脂肪分泌產(chǎn)物的研究，它已經(jīng)不再只是被認(rèn)為是基本的儲能惰性細(xì)胞,其分泌的多種脂肪細(xì)胞因子會參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲

2、和轉(zhuǎn)移。目前發(fā)現(xiàn)人脂肪細(xì)胞能分泌大約100多種多肽物質(zhì),包括血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、肝細(xì)胞生長因子(HGF)、瘦素(LP)、腫瘤壞死因子(TNF-a)、肝素結(jié)合表皮生長因子樣生長因子(HBEGF)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)等等,通稱為脂肪細(xì)胞因子(adipocytokines)。這些脂肪細(xì)胞因子可能是導(dǎo)致乳腺癌惡化的重要因素之一。因此探究乳腺癌和脂肪細(xì)胞之間的相互作用的分子機(jī)制，尋找有效的干預(yù)策略具有非常重要的意義。
　　

3、腫瘤免疫治療是通過調(diào)動人體的免疫系統(tǒng)，通過增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤的免疫力，從而抑制和殺傷腫瘤細(xì)胞。腫瘤免疫治療是目前腫瘤治療的領(lǐng)域中最具前景的研究方向之一。眾所周知，活化 T細(xì)胞需要“雙信號”的介入，即組織相容性復(fù)合體（MHC）-肽－T細(xì)胞抗原受體T細(xì)胞抗原受體（TCR）復(fù)合體作為第一信號以及抗原遞呈細(xì)胞（APC）表面共刺激分子所提供的第二信號（即輔助信號），當(dāng)機(jī)體缺失共刺激分子刺激時會引發(fā)T細(xì)胞的應(yīng)答失衡，使得腫瘤逃脫機(jī)體免疫監(jiān)控。PD-1作

4、為共刺激分子家族中的成員之一，在 T、B細(xì)胞的活化中起著非常重要作用。因此，以 PD-1為靶點(diǎn)的免疫調(diào)節(jié)在抗腫瘤治療中有著重要意義。
　　方法：本研究中，通過動物實(shí)驗(yàn)，在幼年B/C雌性小鼠腹股溝脂肪組織中分離出了一種成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞,稱之為脂肪干細(xì)胞(ADSCs),將其誘導(dǎo)為成熟的脂肪細(xì)胞。將脂肪細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞共培養(yǎng)，利用免疫印跡，免疫組化，實(shí)時定量 PCR實(shí)驗(yàn)方法比較單獨(dú)培養(yǎng)和共培養(yǎng)以后的乳腺癌細(xì)胞4T1和 EMT6蛋白水平和

5、 mRNA水平 PD-L1的表達(dá)情況。同時我們將小鼠分為A B倆組，A組將脂肪細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞（3:1）混合皮下接種，B組單獨(dú)皮下接種乳腺癌細(xì)胞，比較倆組小鼠成瘤能力和腫瘤大小。
　　有研究闡明STAT3信號通路活化與Notch信號通路活化與多種腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)化、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。發(fā)現(xiàn)炎性細(xì)胞因子 IL-1β、TNF-α和 IL-6等可直接或間接激活 STAT3信號，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生 EMT和 CSC轉(zhuǎn)化。通過實(shí)時定量RT-

6、PCR和 ELISA實(shí)驗(yàn)，以及免疫印跡的方法檢測與脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞中， STAT3的磷酸化水平以及炎性細(xì)胞因子 IL-1β、TNF-α和 IL-6等的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：在mRNA水平和蛋白水平，共培養(yǎng)以后的乳腺癌細(xì)胞4T1和EMT6相比于單獨(dú)培養(yǎng)的細(xì)胞能夠高表達(dá)PD-L1。由于PD-1/PD-L1是表達(dá)于多種腫瘤表面的共抑制分子，它在介導(dǎo)乳腺腫瘤細(xì)胞免疫逃逸中起著重要作用。通過動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)將脂肪細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞（3:

7、1）混合皮下接種體內(nèi)成瘤更快，而且更容易發(fā)生腫瘤的肺轉(zhuǎn)移。上述結(jié)果表明，乳腺癌細(xì)胞在脂肪細(xì)胞的作用下，它的遷移能力、侵襲性、轉(zhuǎn)移能力和致瘤原性均顯著增強(qiáng)。表明脂肪細(xì)胞處理的乳腺癌細(xì)胞獲得了惡性表型。
　　與此同時實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)與脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞中，STAT3的磷酸化水平呈明顯升高，Notch剪切體的表達(dá)也是升高。共培養(yǎng)以后的脂肪細(xì)胞中IL-6 mRNA水平表達(dá)增加了十幾倍，而且，STAT3抑制劑可部分逆轉(zhuǎn)與脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)所