原發(fā)性乳腺癌免疫功能低下的分子機制及逆轉(zhuǎn)作用研究.pdf

1、目的： 腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是腫瘤細(xì)胞在與機體免疫系統(tǒng)相互作用中導(dǎo)致免疫監(jiān)視功能降低的結(jié)果。盡管機體內(nèi)存在一套完整的免疫監(jiān)視機制，識別和排斥腫瘤的發(fā)生，但仍難以阻止腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，因為腫瘤細(xì)胞有多種機制可以逃避人體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視。CTLA-4是在T細(xì)胞活化中提供第二信號的一個共刺激分子，對T細(xì)胞的活化起到了負(fù)調(diào)節(jié)作用。CTLA-4可以拮抗CD28的作用，與B7結(jié)合下調(diào)T細(xì)胞反應(yīng)，從而使腫瘤細(xì)胞逃脫機體的免疫監(jiān)視、免疫制裁。本研究主

2、要探討乳腺癌患者免疫功能低下與CTLA-4高表達的相關(guān)性及其可能的作用機制，并用anti-CTLA-4抗體對低下的免疫功能進行逆轉(zhuǎn)治療。 方法： 取6例健康對照及11例未經(jīng)治療的原發(fā)性乳腺癌患者外周血的淋巴細(xì)胞與PHA共同孵育，培養(yǎng)72小時后：(1)MTT法檢測淋巴細(xì)胞的增殖指數(shù)：(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測淋巴細(xì)胞表面IL-2R(CD25)的表達：(3)ELISA法檢測培養(yǎng)上清中IL-2的表達水平：(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測30例未

3、經(jīng)治療的原發(fā)性乳腺癌患者外周血淋巴細(xì)胞表面CTLA-4的表達，并以15例健康女性作為對照；(5)取其中11例CTLA-4高表達乳腺癌患者外周血的淋巴細(xì)胞與anti-CTLA-4抗體共同孵育，對照組是淋巴細(xì)胞加1640培養(yǎng)液，試驗組1是患者淋巴細(xì)胞加PHA和1640培養(yǎng)液，試驗組2是患者淋巴細(xì)胞加PHA、1640培養(yǎng)液和anti-CTLA-4抗體，培養(yǎng)后用MTT法檢測淋巴細(xì)胞的增殖指數(shù)：流式細(xì)胞術(shù)檢測淋巴細(xì)胞表面IL-2R的表達：ELIS

4、A法檢測培養(yǎng)上清液中IL-2的表達水平。 結(jié)果： 1．在相同濃度PHA刺激下乳腺癌患者淋巴細(xì)胞的增殖指數(shù)(1.39±0.22)明顯低于健康對照組的淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)(1.91±0.34)，P<0.01。 2．PHA刺激前乳腺癌患者淋巴細(xì)胞表面IL-2R的表達(7.34％±1.59％)，低于健康對照組(11.20％±1.02％)，P<0.01；PHA刺激后乳腺癌患者淋巴細(xì)胞表面IL-2R的表達為(9.99％±1.68

5、％)，低于健康對照組(14.71％±1.82％)，P<0.01。 3．PHA刺激前乳腺癌患者培養(yǎng)上清中IL-2的表達水平(174.64ng/L±35.42ng/L)，低于健康對照組(239.67 ng/L±33.65 ng/L)，P<0.01：PHA刺激后乳腺癌患者培養(yǎng)上清中IL-2的表達水平為(233.04 ng/L±44.30 ng/L)，低于健康對照組(310.35 ng/L±43.72 ng/L)，P<0.01。

6、 4．乳腺癌患者CD3<'+>CTLA-4<'+>細(xì)胞的百分率(19.75％±4.23％)，明顯高于健康對照組(12.42％±5.60％)，P<0.01。 5．將CTLA-4高表達乳腺癌患者外周血的淋巴細(xì)胞與anti-CTLA-4抗體共同孵育后，anti-CTLA-4抗體組的淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)高于單純PHA組，P<0.01。 6．經(jīng)anti-CTLA-4抗體作用后，乳腺癌患者淋巴細(xì)胞表面IL-2R的表達高于對照組(P<0.

7、01)和單純PHA組(P<0.01)。 7．乳腺癌患者外周血的淋巴細(xì)胞與anti-CTLA-4抗體共同孵育后，培養(yǎng)上清中IL-2的表達水平高于對照組(P<0.01)和PHA組(P<0.01)。 結(jié)論： 1．乳腺癌患者的淋巴細(xì)胞在相同濃度PHA刺激后，其增殖指數(shù)、淋巴細(xì)胞表面IL-2R的表達及培養(yǎng)上清中IL-2的表達水平均低于健康對照，說明乳腺癌患者細(xì)胞免疫功能低下，T細(xì)胞活化與增殖率均低于健康對照。 2．

8、乳腺癌患者外周血T細(xì)胞表面CTLA-4表達增高，其高表達導(dǎo)致了乳腺癌患者B7：CD28/CTLA-4共刺激通路異常，影響了T細(xì)胞徹底清除腫瘤細(xì)胞，從而使腫瘤逃避機體的免疫監(jiān)視、免疫制裁，進一步發(fā)生轉(zhuǎn)移。 3．CTLA-4高表達的乳腺癌患者外周血淋巴細(xì)胞與anti-CTLA-4抗體共同孵育，結(jié)果表明anti-CTLA-4抗體組的淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)、淋巴細(xì)胞表面IL-2R的表達及培養(yǎng)上清中IL-2的表達水平均明顯高于對照組和單純PHA