MCP-1影響乳腺癌MCF-7細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換和遷移的分子調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、乳腺癌是一種嚴(yán)重威脅女性健康的常見(jiàn)惡性腫瘤，而腫瘤轉(zhuǎn)移則是導(dǎo)致癌癥患者死亡的最主要原因。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤微環(huán)境與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，有報(bào)道表明腫瘤微環(huán)境中的趨化因子參與到了腫瘤轉(zhuǎn)移的過(guò)程中。炎癥趨化蛋白因子MCP-1，屬于CC趨化家族成員，為單基因編碼，在人類、大鼠、小鼠及兔等物種中高度保守，被證實(shí)與其特異性受體CCR2結(jié)合后在乳腺癌的轉(zhuǎn)移中起重要作用，但其誘導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制并不清楚。
　　本研究中，首先通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及T

2、ranswell小室實(shí)驗(yàn)證實(shí)MCP-1促進(jìn)了乳腺癌MCF-7細(xì)胞的遷移及侵襲，并且通過(guò)Western blot、免疫熒光實(shí)驗(yàn)及共聚焦實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，MCP-1可以改變細(xì)胞形態(tài)，誘導(dǎo)細(xì)胞骨架重排，抑制E-cadherin的表達(dá)，上調(diào) Fibronectin、Vimentin表達(dá)，從而引發(fā) MCF-7細(xì)胞 EMT的發(fā)生。而RS102895(CCR2拮抗劑)處理之后，抑制了 MCP-1誘導(dǎo)的遷移、侵襲、細(xì)胞骨架重排及EMT發(fā)生。隨后通過(guò)Wester

3、n blot、免疫熒光實(shí)驗(yàn)及熒光定量 PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)，MCP-1可以在轉(zhuǎn)錄后水平穩(wěn)定調(diào)轉(zhuǎn)錄因子Snail的表達(dá)，并促進(jìn)其入核轉(zhuǎn)運(yùn)。通過(guò)Western blot實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)MCP-1可以通過(guò)活化MEK/ERK信號(hào)通路促進(jìn)GSK-3β(ser9)磷酸化來(lái)抑制GSK-3β的活化，從而穩(wěn)定Snail的表達(dá)水平，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的遷移和侵襲及EMT發(fā)生。U0126(MEK/ERK抑制劑)處理抑制了MCP-1介導(dǎo)的Snail的穩(wěn)定

4、進(jìn)而反轉(zhuǎn)了MCP-1誘導(dǎo)的EMT發(fā)生，而LiCl處理后（GSK-3β抑制劑）促進(jìn)了snail的穩(wěn)定，促進(jìn)了MCF-7細(xì)胞的EMT發(fā)生。最后我們通過(guò)熒光定量 PCR、明膠酶譜實(shí)驗(yàn)及ELISA實(shí)驗(yàn)證實(shí)MCP-1可以通過(guò)ERK/GSK-3β信號(hào)通路上調(diào)MMP-2/9及VEGF的表達(dá)。
　　結(jié)果說(shuō)明MCP-1與CCR2特異性結(jié)合后可通過(guò)MEK/ERK/GSK-3β信號(hào)通路來(lái)促進(jìn)snail的穩(wěn)定從而誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生間充質(zhì)轉(zhuǎn)換及促進(jìn)MC