蟾蜍靈誘導乳腺癌MCF-7細胞周期阻滯和凋亡作用機制的研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文蟾蜍靈誘導乳腺癌MCF7細胞周期阻滯和凋亡作用機制的研究姓名：岳瑤申請學位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學指導教師：劉云鵬20040301天津血液病研究所。二、實驗方法1細胞培養(yǎng)：乳腺癌細胞系MCF一7細胞購自天津血液病研究所，按本實驗室培養(yǎng)常規(guī)，生長于含有56℃、30分鐘滅活后的10％胎牛血清和12U／L慶大霉素的RPMI一1640培養(yǎng)液中，于37℃、5％C02、飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)傳代培養(yǎng)。所有實驗均采用對數(shù)生長期細胞。

2、2細胞增殖測定：細胞增殖活力測定采用MTr法。3細胞形態(tài)學變化和凋亡的檢測：采用瑞士一吉姆薩染色進行形態(tài)學分析。4細胞周期測定：應用流式細胞儀進行細胞周期解析。5細胞周期和凋亡相關蛋白的檢測：采用免疫組化法檢測p2l、pRb、bcl一2、caspase一9蛋白的表達。6統(tǒng)計學處理：所用數(shù)據(jù)為三次獨立實驗的平均值，數(shù)據(jù)處理采用SPSS統(tǒng)計學軟件進行t檢驗和X2檢驗及方差分析。結果一、蟾蜍靈對MCF一7細胞增殖的抑制作用蟾蜍靈以時間、劑量依

3、賴的方式抑制MCF一7細胞的增殖。24、48h的Ic。分別為805、583nmol／L二、蟾蜍靈誘導MCF一7細胞周期阻滯和凋亡10～100nmol／L的蟾蜍靈作用24h后觀察形態(tài)學上的改變，可見細胞體積增大，多倍體細胞多見；1000nmol／L的蟾蜍靈作用24h可見胞體完整，胞核濃縮或碎裂。三、蟾蜍靈誘導MCF一7細胞發(fā)生G2／M阻滯經(jīng)不同濃度的蟾蜍靈處理后，流式細胞儀檢測顯示MCF一7細胞發(fā)生G2／M期阻滯，其中100nmol／L的