Surfactin的結(jié)構(gòu)鑒定及其誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞MCF-7凋亡的研究.pdf

1、枯草芽孢桿菌能夠產(chǎn)生多種脂肽類(lèi)生物表面活性劑，其中的Surfactin由于具有很強(qiáng)的表面張力以及廣泛的生物活性受到國(guó)內(nèi)外研究者的關(guān)注。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)脂肽Surfactin的研究主要集中在其表面活性方面，而對(duì)其生物活性特別是在抗腫瘤活性方面的研究少有報(bào)道。本論文以從納豆中分離得到的Bacillus natto TK-1為研究對(duì)象，在前期工作的基礎(chǔ)上，對(duì)脂肽進(jìn)行了分離純化，并研究了Surfactin對(duì)細(xì)胞的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用，同時(shí)研究了

2、MCF-7細(xì)胞周期變化及凋亡現(xiàn)象。從相關(guān)蛋白方面考察了Surfactin誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的信號(hào)途徑。以確定Surfactin誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的主要途徑。
　　 利用酸沉、醇提和薄層層析等方法從Bacillus natto TK-1發(fā)酵液中分離得到的脂肽經(jīng)過(guò)HPLC、ESI-MS和IR分析可知是分子量為1036D的脂肪酸鏈上有15個(gè)碳的環(huán)狀脂肽Surfactin。通過(guò)四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)法發(fā)現(xiàn)Surfactin在體外

3、可以很好的抑制腫瘤細(xì)胞MCF-7的增殖，并且呈現(xiàn)出濃度和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系，其中細(xì)胞被處理48 h時(shí)的IC50是38.77mg/L。倒置顯微鏡和熒光顯微鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Surfactin可以引起細(xì)胞出現(xiàn)一些典型的形態(tài)學(xué)改變。通過(guò)原位缺口末端標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)凋亡(TUNEL)發(fā)現(xiàn)Surfactin可誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡，而且這種抑制作用呈現(xiàn)明顯的時(shí)間依賴(lài)性。Fluo-3/AM探針激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i相對(duì)熒光強(qiáng)度的變化隨著時(shí)間的延長(zhǎng)由