槲皮素誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞自噬性死亡的研究.pdf

1、目的：研究自噬性死亡在槲皮素(quercetin，Que)誘導(dǎo)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞死亡中的作用，初步探討自噬的作用機(jī)制。 方法：用不同濃度的Que處理人乳腺癌MCF-7細(xì)胞，采用MTT法測(cè)定Que對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用；用光鏡觀察Que給藥后MCF-7細(xì)胞形態(tài)的變化；應(yīng)用Hochest33258染色及吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)雙染色、MDC熒光染色觀察給藥后MCF-7細(xì)胞的凋亡和自噬征象；檢測(cè)LDH漏出率以觀察用

2、自噬特異性抑制劑3-MA阻斷自噬后Que抑瘤作用的變化；采用MTT法測(cè)定用溶酶體膜堿化劑氯喹阻斷自噬后Que抑瘤作用的變化；免疫熒光法和測(cè)量線粒體膜電位研究自噬與凋亡在Que誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞死亡中的分子機(jī)制。 結(jié)果：Que對(duì)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)有顯著的抑制作用，且此作用呈明顯的時(shí)間、劑量依賴性；光鏡顯示Que給藥后MCF-7細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著變化；Hoehest33258染色及吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)染色顯示Que給藥后后

3、期可誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生凋亡；MDC熒光染色顯示Que給藥后早期可誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生自噬；LDH漏出率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在Que給藥前和給藥后阻斷自噬，Que對(duì)MCF-7細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用均增強(qiáng)；MTT法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在Que給藥后堿化溶酶體膜可增強(qiáng)Que對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制作用；免疫熒光結(jié)果顯示，Que誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生自噬時(shí)，自噬特異性蛋白LC3被激活；線粒體膜電位測(cè)量結(jié)果顯示Que給藥后線粒體膜電位下降。 結(jié)論：Q