AIF-1調(diào)控乳腺癌細胞增殖的分子機制研究.pdf

1、同種異體移植炎癥因子-1(Allograft inflammatory factor-1，AIF-1）是由147個氨基酸組成的多肽，定位于胞漿，具有鈣離子結(jié)合能力的炎癥支架蛋白，主要由激活的巨噬細胞表達和分泌，是一種多功能的細胞因子，廣泛參與到炎癥和免疫相關(guān)的多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程，包括器官移植、心血管疾病、免疫應答、自身免疫性疾病、生殖、腫瘤等疾病過程。
　　乳腺癌是危害女性健康的主要惡性腫瘤，其復雜的致病機理仍然不很清楚。越來

2、越多的研究表明，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中所形成的腫瘤微環(huán)境里，腫瘤相關(guān)性巨噬細胞及其分泌的各種細胞因子廣泛參與到了腫瘤的發(fā)生、生長、轉(zhuǎn)移和免疫逃逸等方面。實驗室前人在研究炎癥因子AIF-1與乳腺腫瘤的相關(guān)性時對乳腺癌臨床樣本分析發(fā)現(xiàn)AIF-1在乳腺導管癌中高表達，且與腫瘤的大小成正相關(guān)，同時體內(nèi)和體外實驗均證實上調(diào)AIF-1的表達，能夠促進乳腺腫瘤的生長。但是AIF-1調(diào)控乳腺癌增殖的具體分子機制和所涉及的信號通路尚不清楚。
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3、MA28（a disintegrin and metalloproteinase28）是一種解鏈蛋白-金屬蛋白酶，具有蛋白水解酶的功能，有兩種形式：分泌型（ADAM28s）和膜整合型（ADAM28m）。通過切割多種細胞因子或其復合物（vWF、IGFBP-3、CTGF）激活下游信號通路參與調(diào)控體內(nèi)多種腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移。
　　本論文中，首先通過優(yōu)化rhAIF-1蛋白純化體系，獲得具有生物活性的高純度重組蛋白rhAIF-1，并以MDA-

4、MB-231和MDA-MB-361這兩株乳腺癌細胞系為實驗模型，直接在培養(yǎng)基中添加rhAIF-1后，發(fā)現(xiàn)rhAIF-1能夠促進細胞的增殖且呈現(xiàn)劑量和時間依賴性。將純化的蛋白rhAIF-1用羅丹明標記后與細胞共孵育一段時間，共聚焦成像技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)這種外源的蛋白能夠穿過細胞膜定位在細胞質(zhì)中，進一步分析發(fā)現(xiàn)rhAIF-1在細胞質(zhì)不均等分布，而且AIF-1雖然能夠聚集在細胞核的周圍，但并不能進入細胞核，這提示我們可能有其他因子參與到AIF-1調(diào)

5、控細胞增殖的過程。為了找到rhAIF-1可能的相互作用蛋白，我們采用蛋白質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)，銀染色后分析發(fā)現(xiàn)在70-100KDa有明顯的特異性條帶，通過質(zhì)譜分析比對數(shù)據(jù)庫中的序列后，初步確定ADAM28m為rhAIF-1可能的相互作用蛋白。接著，我們再次通過免疫共沉淀技術(shù)結(jié)合免疫印跡對rhAIF-1與ADAM28m兩者之間的相互作用進行驗證，發(fā)現(xiàn)rhAIF-1能夠免疫沉淀出 ADAM28m。進一步研究發(fā)現(xiàn)下調(diào)ADAM28m的表達，rhAI