MPPa聲動力殺傷肝癌細(xì)胞的實驗研究.pdf

1、背景與目的:原發(fā)性肝癌(以下簡稱肝癌)是世界范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一,也是亞洲和非洲地區(qū)惡性腫瘤中導(dǎo)致死亡的主要因為,尤其是在中國。據(jù)估計全球約有一半的原發(fā)性肝癌病例發(fā)生在中國。目前肝癌的治療方法主要是手術(shù)切除和放化療。雖然手術(shù)和放化療對肝癌的治療取得了一定的療效,但是肝癌的五年生存率低,死亡率仍然很高。因此,尋找一種新的治療肝癌的方法迫在眉睫。大量研究表明聲動力學(xué)療法在惡性腫瘤治療中具有較高的應(yīng)用前景。本研究旨在探討MPPa聲動力作用

2、對小鼠肝癌細(xì)胞H22的殺傷作用及機制。
　　 材料與方法:先用流式細(xì)胞儀檢測加藥孵育后的H22細(xì)胞內(nèi)MPPa的平均熒光強度值以掌握H22細(xì)胞對MPPa的吸收規(guī)律；再通過MTT法細(xì)胞毒性檢測MPPa聲動力作用后對小鼠肝癌H22細(xì)胞生長的影響；并在倒置顯微鏡下觀察H22細(xì)胞的形態(tài)變化；采用測溫探針監(jiān)測超聲處理過程中細(xì)胞懸液的溫度變化情況；采用Hoechst33258細(xì)胞核熒光染色法觀察MPPa聲動力作用后小鼠肝癌細(xì)胞H22細(xì)胞核的變

3、化情況；再用Annexin V-FITC/PI染色結(jié)合流式細(xì)胞儀用以檢測MPPa聲動力作用對小鼠肝癌H22細(xì)胞凋亡的影響；采用透射電子顯微鏡觀察MPPa,聲動力作用后H22細(xì)胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的變化；采用Rhodamine123染色結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測來了解H22細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的變化；最后采用DCHF-DA染色了解H22細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生活性氧(reactive oxygen species,ROS)的情況。
　　 結(jié)果:從流式細(xì)胞術(shù)檢測的

4、結(jié)果可以看到加入MPPa后小鼠肝癌細(xì)胞H22細(xì)胞內(nèi)的熒光強度值隨著孵育時間的增加而增高,在20小時達(dá)最大值,此后趨于平臺；用MTT細(xì)胞毒性檢測法發(fā)現(xiàn)MPPa聲動力作用組對小鼠肝癌H22細(xì)胞的殺傷率明顯高于其他對照組,且殺傷作用呈時間依賴關(guān)系；在倒置光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)與其他對照組相比,MPPa聲動力實驗組的細(xì)胞數(shù)量明顯減少,細(xì)胞出現(xiàn)同縮,可見許多細(xì)胞碎片；溫度監(jiān)測結(jié)果顯示細(xì)胞懸液的溫度隨著超聲處理時間的增加而有所升高,但是在本實驗所選用

5、的時間范圍內(nèi)溫度增高不明顯,在20秒的溫度不超過37度；Hoechst33258細(xì)胞核染色結(jié)果顯示MPPa聲動力組在超聲處理后6小時出現(xiàn)了明顯的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象；用AnnexinV-FITC/PI試劑盒染色流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)MPPa聲動力作用組在超聲處理后6小時,細(xì)胞凋亡率較其他對照組明顯增加；通過透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)MPPa聲動力組在超聲處理后6小時,出現(xiàn)線粒體腫脹和細(xì)胞壞死,凋亡小體；用Rhodamine123染色經(jīng)流式細(xì)胞儀對H22細(xì)胞線

6、粒體膜電位檢測顯示MPPa聲動力組在超聲作用后6小時,H22細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位顯著降低；用DCFH-DA標(biāo)記經(jīng)流式細(xì)胞儀對H22細(xì)胞內(nèi)ROS檢測顯示MPPa聲動力組在超聲作用后3小時,H22細(xì)胞內(nèi)ROS含量明顯增加。
　　 結(jié)論:MPPa聲動力作用能夠有效的殺傷肝癌細(xì)胞,此殺傷作用可能是通過使細(xì)胞內(nèi)ROS生成增加而致線粒體功能受損從而誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡實現(xiàn)的。MPPa聲動力療法可能是一種潛在的治療肝癌的新方法。因此MPPa可以作為一