陡脈沖電場對肝癌細(xì)胞殺傷效應(yīng)及機(jī)理研究.pdf

1、電脈沖治療癌癥是一種新的癌癥物理治療方法，本文用電脈沖對細(xì)胞施加不同時間的電刺激，通過凋亡試驗，細(xì)胞膜穿孔，線粒體跨膜電位變化實(shí)驗來證實(shí)電脈沖對腫瘤組織的有效殺傷和抑制作用，研究脈沖個數(shù)與細(xì)胞響應(yīng)的量效關(guān)系以及腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞對電場刺激的差異性響應(yīng)，得到以下結(jié)論：
　　 1.用Annexin V-FITC凋亡試劑盒和流式細(xì)胞技術(shù)檢測經(jīng)1KV/cm，100μs的電脈沖作用人肝細(xì)胞L02和人肝癌細(xì)胞HepG2在不同的作用時間點(diǎn)(8

2、s，15s，30s，60s)下的凋亡效應(yīng)。結(jié)果顯示，8s刺激時間不足以誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，而15s，30s，60s的刺激時間與對照組相比可以明顯的誘導(dǎo)HepG2凋亡，并且凋亡率隨刺激時增加而增大，說明延長刺激時間可以增大腫瘤細(xì)胞的凋亡程度；另外，在刺激60s時，腫瘤細(xì)胞凋亡率是正常細(xì)胞的2倍，這表明腫瘤細(xì)胞比正常細(xì)胞對電脈沖的刺激更敏感。
　　 2.通過采用羅丹明123探針染色，用激光共聚焦顯微鏡實(shí)時觀測細(xì)胞的線粒體膜電位熒

3、光強(qiáng)度變化的實(shí)驗研究，觀察到電刺激30s前細(xì)胞線粒體膜電位無明顯變化，而30后開始出現(xiàn)膜電位陡升后急劇降低的變化現(xiàn)象。由線粒體膜電位降低是凋亡早期現(xiàn)象的理論推測60s的作用時間能毀滅性的殺死腫瘤細(xì)胞，且電脈沖殺死細(xì)胞的線粒體膜電位變化為刺激中陡升后急劇降低，這是首次通過激光共聚焦顯微鏡觀測到線粒體膜電位升高再降低的有趣現(xiàn)象。
　　 3.通過PI探針染色，用倒置熒光顯微鏡實(shí)施觀測并拍攝熒光照片，發(fā)現(xiàn)電脈沖刺激8s后無明顯的穿孔現(xiàn)象