α-GalCer負載DC激活CIK細胞對肝癌細胞的殺傷效應研究.pdf

1、樹突狀細胞是迄今體內功能最強大的抗原提呈細胞，在免疫應答誘導中有獨特的地位。CIK細胞是新型的免疫活性細胞，是由多種細胞因子誘導產生的殺傷細胞，具有T細胞的抗瘤活性和MHC限制性殺瘤的特點。CIK細胞和DC細胞是目前應用較多的過繼免疫治療的有效方法。α-半乳糖神經(jīng)酰胺在臨床試驗中作為一種抗癌劑，對很多實體腫瘤均有效。腫瘤的臨床實驗表明，注射α-GalCer負載的DC比單獨注射α-GalCer呈現(xiàn)出更大的抗腫瘤活性。但荷載α-GalCer

2、的成熟DC對CIK細胞的功能活化還尚未見研究。本研究在以往研究的基礎上，探索α-GalCer負載DC對CIK細胞的激活作用及殺傷活性的影響，為DC-CIK在腫瘤免疫治療中的應用提供依據(jù)。
　　目的:
　　探討α-GalCer負載對人外周血樹突狀細胞(DC)的激活作用及功能的影響;研究負載α-GalCer的DC能否在體外激活乙肝患者外周血中的NKT細胞;探討α-GalCer-DC與CIK共培養(yǎng)對CIK細胞表型、增殖活性及殺傷肝

3、癌細胞效率的影響。
　　方法:
　?。ㄒ唬┎捎妹芏忍荻入x心法從人外周血中分離出單個核細胞，懸浮細胞誘導培養(yǎng)CIK細胞，貼壁細胞誘導培養(yǎng)DC細胞，在光鏡下觀察其形態(tài)和生物學特征;流式細胞儀檢測DC與CIK細胞的免疫表型。（二）流式細胞儀檢測α-GalCer負載的DC細胞表型，qRT-PCR檢測DC細胞相關基因的mRNA水平。（三）采用DC和α-GalCer來誘導培養(yǎng)患者外周血NKT細胞，流式細胞儀檢測NKT的免疫表型和細胞因子

4、的表達水平。（四）將α-GalCer-DC細胞與CIK細胞共培養(yǎng)，流式細胞儀檢測DC與各組CIK細胞表面標志物;臺盼藍染色法檢測各組CIK細胞的增殖倍數(shù);qRT-PCR檢測CIK細胞功能相關基因的表達情況;CCK-8試劑盒檢測α-GalCer-DC對CIK細胞殺傷HepG2的影響。
　　結果:
　　1.經(jīng)過多種細胞因子誘導，可獲得CIK細胞和成熟的DC細胞。CIK細胞高表達CD3+CD8+和CD3+CD56+，成熟DC細胞高

5、表達CD86，CD80，CD83和CD11c，低表達CD14。
　　2.α-GalCer負載可促進DC細胞成熟，細胞表面標志物CD80，CD86，CD83，CD11c的陽性率均升高，表面趨化因子受體CCR-7、IL-12、IL-10的mRNA水平升高。
　　3.DC和α-GalCer聯(lián)合誘導培養(yǎng)患者外周血NKT細胞，可以獲得高表達TCRVα24TCRVβ11的雙陽性NKT細胞，并使NKT分泌高水平的IL-4和INF-γ。

6、r>　　4.α-GalCer-DC與CIK共培養(yǎng)，可顯著提高CIK細胞CD3+CD56+的表達和增殖活性;可顯著提高INF-γ、IL-12、穿孔素和顆粒酶素B的mRNA表達水平。CCK-8法檢測各組CIK細胞的殺傷活性，在同一效靶比時，α-GalCer-DC-CIK細胞組對靶細胞的殺傷作用最強，明顯高于CIK、DC-CIK細胞組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。CCK-8法檢測結果顯示:CIK細胞對肝癌細胞HepG2細胞有明顯的細胞