樹(shù)突狀細(xì)胞激活細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞抗肝癌作用的研究.pdf

1、目的 探討轉(zhuǎn)染小鼠肝癌H22細(xì)胞總RNA的樹(shù)突狀細(xì)胞激活的細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞體外的抗瘤作用。 方法 (1)無(wú)菌取小鼠骨髓細(xì)胞，應(yīng)用rmGM-CSF和rmIL-4體外刺激下增殖分化為DC，并對(duì)其進(jìn)行鑒定。(2)無(wú)菌取小鼠脾臟，制備脾淋巴細(xì)胞并在體外置于RPMll640完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。小鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)2h后，收取非粘附細(xì)胞，加入rmlFN-g、anti-CD3、rmlL-2和tinIL-1b誘導(dǎo)成為CIK細(xì)胞。

2、(4)體外常規(guī)提取H22細(xì)胞總RNA，經(jīng)紫外分光光度儀測(cè)定0D260/0D280，計(jì)算總RNA含量和純度，用1％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的完整性。(5)以H22細(xì)胞總RNA轉(zhuǎn)染DC，將轉(zhuǎn)染或未轉(zhuǎn)染總RNA的DC分別和CIK細(xì)胞或脾淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)。(6)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)效應(yīng)細(xì)胞分8組：轉(zhuǎn)染H22細(xì)胞總RNA的DC激活的CIK細(xì)胞、未轉(zhuǎn)染H22細(xì)胞總RNA的DC激活的CIK細(xì)胞、H22細(xì)胞總RNA激活的CIK細(xì)胞、CIK細(xì)胞、轉(zhuǎn)染H22細(xì)胞總

3、RNA的DC激活的脾淋巴細(xì)胞、未轉(zhuǎn)染H22細(xì)胞總RNA的DC激活的脾淋巴細(xì)胞、H22細(xì)胞總RNA激活的脾淋巴細(xì)胞和脾淋巴細(xì)胞；靶細(xì)胞為It22細(xì)胞和S180細(xì)胞，效靶比為10:1，用MTT法測(cè)定各組效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷活性。 結(jié)果 (1)從每只小鼠骨髓中提取的DC前體細(xì)胞和DC在體外經(jīng)小鼠rmGM-CSF和rmlL-4培養(yǎng)和擴(kuò)增7d后可獲得約(2-3)×10<'6>個(gè)DC，顯微鏡下觀察其具有較典型的DC形態(tài)；經(jīng)用熒光抗

4、體分析后可判定其為DC，純度達(dá)70％以上。(2)所獲得H22細(xì)胞總RNA的OD260/OD280>1.90，H22細(xì)胞總RNA的1％瓊脂糖凝膠電泳圖顯示完整的28S和18S兩條帶。(3)每只小鼠脾臟獲得(2-4)×10<'7>個(gè)脾淋巴細(xì)胞，在培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞體積變化不大、增殖緩慢，培養(yǎng)至第13d大約擴(kuò)增3倍。(4)CIK細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞體積由小變大，且呈明顯多形性。CIK細(xì)胞能快速增殖，至第13d大約擴(kuò)增35-50倍。(5)細(xì)胞毒性

5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：①用不同方式激活的CIK細(xì)胞對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性均高于其對(duì)應(yīng)方式激活的脾淋巴細(xì)胞對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性(P<0.05)。②轉(zhuǎn)染H22細(xì)胞總RNA的DC激活的CIK細(xì)胞對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性高于其對(duì)S180細(xì)胞的殺傷活性(P<0.05)。③轉(zhuǎn)染H22細(xì)胞總RNA的DC激活的CIK細(xì)胞對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性高于其他各組效應(yīng)細(xì)胞對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性(P<0.05)。 結(jié)論 (1)從小鼠骨髓中提取的DC前體細(xì)胞在體