細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞抗腫瘤研究.pdf

1、隨著人群平均壽命的延長(zhǎng)和環(huán)境污染物的蓄積，惡性腫瘤的疾病負(fù)荷有加重的趨勢(shì)，與此同時(shí)，腫瘤的常規(guī)治療方法日趨成熟，但也暴露出其缺陷和局限性，包括正常組織不可避免的損傷和第二原發(fā)腫瘤風(fēng)險(xiǎn)的增加等等。因此，近三十年來(lái)，腫瘤的免疫治療，尤其是過(guò)繼免疫治療研究受到了廣泛的關(guān)注，也取得了相當(dāng)?shù)某晒?細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK細(xì)胞)是由淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK細(xì)胞)發(fā)展而來(lái)的一種新的腫瘤過(guò)繼免疫治療方法，自上世紀(jì)90年代以來(lái)，各國(guó)

2、學(xué)者對(duì)其作用機(jī)制和臨床應(yīng)用進(jìn)行了深入探索。與LAK細(xì)胞相比，ClK細(xì)胞具有殺傷活性強(qiáng)、不良反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)，目前已經(jīng)在國(guó)內(nèi)外多個(gè)研究中心進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。 本項(xiàng)研究是經(jīng)過(guò)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局的批準(zhǔn)，對(duì)中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院研制的CIK細(xì)胞進(jìn)行CIK細(xì)胞抗腫瘤Ⅰ期臨床試驗(yàn)，研究自體來(lái)源CIK細(xì)胞擴(kuò)增技術(shù)和抗腫瘤活性，探討CIK細(xì)胞臨床應(yīng)用的安全性以及其對(duì)于腫瘤患者體內(nèi)T細(xì)胞免疫功能的影響，同時(shí)初步論證CIK細(xì)胞對(duì)于B細(xì)胞非霍奇

3、金淋巴瘤的治療價(jià)值。 本項(xiàng)研究的第一、第二部分從21例惡性腫瘤患者(包括肝癌10例、白血病3例、淋巴瘤2例、腎癌2例、胃癌1例、肺癌2例、卵巢癌1例)采集外周血單個(gè)核細(xì)胞體外培養(yǎng)CIK細(xì)胞，培養(yǎng)第10天采樣測(cè)定CIK細(xì)胞擴(kuò)增情況、效應(yīng)蛋白表達(dá)水平和體外殺傷活性，隨后將受試者按CIK細(xì)胞輸注劑量分為四個(gè)治療組觀察不良反應(yīng)，并測(cè)定輸注前后患者外周血淋巴細(xì)胞活化相關(guān)表面標(biāo)志變化情況。我們從21例惡性腫瘤患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞成功擴(kuò)增了

4、CIK細(xì)胞，培養(yǎng)第10天采樣，細(xì)胞總數(shù)平均擴(kuò)增12.8倍(6.3倍～22.8倍)，CD3<'+>CD56<'+>細(xì)胞數(shù)平均擴(kuò)增544.6倍(131.0倍～1586.9倍)；細(xì)胞群體中18.59％(10.92％～30.16％)合成IFN-γ，26.26％(18.43％～35.08％)合成。TNF-α，82.74％(50.30％～93.30％)合成穿孔素，79.97％(55.79％～95.15％)合成顆粒酶B；在效靶比10：1的情況下，4小

5、時(shí)內(nèi)能夠殺傷72.95％(60.03％～81.08％)的K562細(xì)胞。21例惡性腫瘤患者中未出現(xiàn)導(dǎo)致研究中斷的嚴(yán)重不良事件，CIK細(xì)胞最大耐受劑量20.1×10<'9>，觀察到WHO 2級(jí)發(fā)熱5例，一過(guò)性白細(xì)胞減少2例，均能迅速恢復(fù)正常；CIK細(xì)胞輸注后，患者外周血淋巴細(xì)胞表面CD25、CD38、CD69表達(dá)均有明顯上調(diào)，P<0.001。 本項(xiàng)研究的第三部分從4例復(fù)發(fā)/難治性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者采集外周血單個(gè)核細(xì)胞體外培養(yǎng)C

6、IK細(xì)胞，培養(yǎng)第10天采樣測(cè)定CIK細(xì)胞擴(kuò)增情況和體外殺傷活性，受試者接受CIK細(xì)胞治療聯(lián)合全身化療，觀察不良反應(yīng)并評(píng)價(jià)腫瘤負(fù)荷消長(zhǎng)，同時(shí)測(cè)定輸注前后患者外周血淋巴細(xì)胞活化相關(guān)表面標(biāo)志和抑制T細(xì)胞亞群比率變化情況。我們同樣從4例復(fù)發(fā)/難治性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞成功擴(kuò)增了CIK細(xì)胞，培養(yǎng)第10天采樣，細(xì)胞總數(shù)平均擴(kuò)增35.5倍(27.1倍～45.3倍)，CD3<'+>細(xì)胞數(shù)平均擴(kuò)增46.8倍(30.0倍～65.8倍)

7、，CD3<'+>CD56<'+>細(xì)胞數(shù)平均擴(kuò)增1001.0倍(669.4倍～1467.3倍)，在效靶比10：1的情況下，4小時(shí)內(nèi)能夠殺傷67.25％(59.30％～75.10％)的K562細(xì)胞；4例受試者共接受了11個(gè)療程的CIK細(xì)胞治療，平均每療程劑量(19.3±2.1)×10<'+>，最大耐受劑量21.3×10<'9>，其中7個(gè)療程為聯(lián)合全身化療，4個(gè)療程為單獨(dú)用藥，觀察到WHO 2級(jí)發(fā)熱2例3人次，未出現(xiàn)導(dǎo)致研究中斷的嚴(yán)重不良事件

8、，在7個(gè)療程聯(lián)合全身化療的受試者中，與既往治療時(shí)相比，加用CIK細(xì)胞后骨髓抑制的持續(xù)時(shí)間與嚴(yán)重程度沒(méi)有加重，也沒(méi)有發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥，對(duì)常規(guī)全身化療無(wú)不良影響；CIK細(xì)胞治療2療程后，受試者外周血淋巴細(xì)胞CD69表達(dá)率平均增加122.90％(22.76％～349.86％)，CD4<'+>CD25<'+>細(xì)胞亞群平均降低25.78％(5.68％～72.37％)，2例受試者CD4/CD8比率有所改善，治療期間隨訪，4例受試者中1例部分反應(yīng)、2例