顧康生細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞cik與腫瘤治療

1、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)與腫瘤治療,顧康生,主要內(nèi)容,,,1.CIK發(fā)展概況,,,,2.CIK基礎(chǔ)介紹,3.CIK的臨床應(yīng)用,4.CIK治療存在的問(wèn)題,5.CIK治療前景,schmidt R報(bào)道CIK細(xì)胞的存在,Negrin R S報(bào)道CIK細(xì)胞治療惡性腫瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果,國(guó)內(nèi)北京大學(xué)人民醫(yī)院首先報(bào)道CIK細(xì)胞治療白血病,國(guó)內(nèi)有148篇CIK研究報(bào)道，但以基礎(chǔ)研究為主，臨床應(yīng)用報(bào)道較少。,1986年,1994年,1996年,200

2、6年止,CIK發(fā)展概況,CIK發(fā)展概況,到目前為止，國(guó)內(nèi)有21個(gè)省和直轄市均有關(guān)于CIK的文獻(xiàn)報(bào)道，但安徽省是空白。而國(guó)外還處于科研階段，中國(guó)是世界上唯一批準(zhǔn)CIK細(xì)胞治療用于臨床的國(guó)家。,CIK發(fā)展概況,美國(guó)“國(guó)際腫瘤生物/免疫治療及基因治療”2000年年會(huì)總結(jié)報(bào)告中指出：“生物治療是目前知道的唯一一種有望完全消滅癌細(xì)胞的治療手段，21世紀(jì)是腫瘤生物治療的時(shí)代”。因而人們從沒(méi)有放棄對(duì)生物治療的探索。,,,CIK細(xì)胞基礎(chǔ)介紹,CIK最初

3、是指在正常人體外周血中只占1～5%的CD3+CD56+的T淋巴細(xì)胞?目前國(guó)內(nèi)外制備的用于過(guò)繼免疫治療的CIK細(xì)胞,實(shí)際上是體外擴(kuò)增出的以CD3+CD56+?CD3+CD8+為主的異質(zhì)性細(xì)胞群,來(lái)源于人外周血單個(gè)核細(xì)胞，并在體外經(jīng)CD3McAb和IFN-r、IL-2等多種細(xì)胞因子共培養(yǎng)后獲得,,,主要效應(yīng)細(xì)胞的表面標(biāo)志為CD3+CD56+,具有廣泛的非MHC限制的極強(qiáng)的溶瘤活性?,,,,,,,,,對(duì)多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感,CIK作用特點(diǎn)

4、,,抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞Fas-FasL凋亡,CIK作用特點(diǎn),,CIK細(xì)胞雖然以CD3＋CD56+細(xì)胞為主要效應(yīng)細(xì)胞，但卻沒(méi)有T淋巴細(xì)胞殺傷時(shí)的MHC限制性。對(duì)于多種腫瘤細(xì)胞系（NK敏感的K562和NK不敏感的Hela、HL60、人T細(xì)胞急淋白血病細(xì)胞系CCRF-CEM，人淋巴瘤細(xì)胞系OCI-LY8/TAM53，人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29、CR75、人腎癌細(xì)胞系A(chǔ)704）和新鮮腫瘤組織均表現(xiàn)出強(qiáng)大的殺傷活性。,1抗瘤譜廣,,CIK

5、細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中加入IFN-r 、IL-la、抗CD3 McAb、IL-2等因子后, 細(xì)胞增殖速度迅速加快，遠(yuǎn)超過(guò)LAK細(xì)胞 。在培養(yǎng)第22天增殖曲線達(dá)頂峰，約增加100倍，其中CD3＋CD56＋細(xì)胞不僅絕對(duì)數(shù)量增加 1000倍以上．且所占百分比也大幅上升，至培養(yǎng)28-30天時(shí)達(dá)平臺(tái)期，細(xì)胞毒活性亦達(dá)峰值，而LAK細(xì)胞培養(yǎng)前后數(shù)量沒(méi)有明顯增加。,2增殖速度快,CIK作用特點(diǎn),,3殺瘤活性高,CIK細(xì)胞是以CD3＋CD56＋ T細(xì)胞為主的

6、異質(zhì)細(xì)胞群，大量體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)CIK細(xì)胞較LAK細(xì)胞具備更強(qiáng)大的殺瘤活性，而且其體內(nèi)殺瘤細(xì)胞毒性的維持不必依賴大劑量外源性IL-2的持續(xù)給予。體外實(shí)驗(yàn)中，等數(shù)量的CIK細(xì)胞比LAK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞系的殺傷能力稍高或相近，但因CIK細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中CD 3＋CD56+效應(yīng)細(xì)胞增長(zhǎng)迅速，故CIK細(xì)胞的總殺傷單位為L(zhǎng)AK細(xì)胞的73倍甚至更高，其殺傷效率顯著高于LAK細(xì)胞,CIK作用特點(diǎn),,WOLF用阿霉素和長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)多重耐藥細(xì)胞系K562／

7、DOX和CCRF-CEM-VBI 發(fā)現(xiàn)CIK細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感的親本細(xì)胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有強(qiáng)大的殺傷活性，兩者比較無(wú)差別。,,4,對(duì)多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感,CIK作用特點(diǎn),,,5,對(duì)正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性小,Scheffold 通過(guò)CFU-GM形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CIK細(xì)胞對(duì)骨髓造血前體細(xì)胞的影響發(fā)現(xiàn)CIK細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞的殺傷強(qiáng)度高達(dá)3級(jí)，但對(duì)GM-CFU僅有不足1級(jí)的抑制。HoIye也證實(shí)CIK細(xì)胞對(duì)正常髓系克隆生成幾乎沒(méi)有

8、影響，只是對(duì)紅系的生成顯示出輕度抑制。,CIK作用特點(diǎn),,已證明過(guò)繼免疫治療失敗的一個(gè)重要原因是腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)的某些蛋白(主要是Fasl)能誘導(dǎo)過(guò)繼效應(yīng)細(xì)胞凋亡，而CIK細(xì)胞雖然在Fas被占據(jù)后會(huì)引起少量細(xì)胞凋亡，但對(duì)其殺瘤細(xì)胞毒性沒(méi)有明顯影響 。,,6,抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞Fas-FasL凋亡,CIK作用特點(diǎn),LAK細(xì)胞基礎(chǔ)介紹,來(lái)源于由IL-2激活的淋巴細(xì)胞，活性必須IL-2維持，而大劑量IL-2有嚴(yán)重的不良反應(yīng),其表型標(biāo)

9、志尚未確定，但存在異質(zhì)性，即有幾種表型。,其識(shí)別和殺傷作用是非特異性和MHC非限制性，對(duì)自體腫瘤細(xì)胞、同種或異種腫瘤細(xì)胞均有殺傷作用。,體外擴(kuò)增較困難，臨床應(yīng)用有效性不高，適應(yīng)范圍較窄。,TIL細(xì)胞基礎(chǔ)介紹,來(lái)源于腫瘤組織中分離出的淋巴細(xì)胞，并在體外經(jīng)IL-2誘導(dǎo)培養(yǎng)擴(kuò)增，體外抗腫瘤的活性是LAK的50~100倍。,TIL表達(dá)CD3＋CD8＋或CD3 ＋CD4＋標(biāo)志,腫瘤殺傷活性為MHC限制性，即為自體腫瘤特異性殺傷細(xì)胞。,TIL的制備

10、困難，要制備出臨床治療量的細(xì)胞數(shù)必須獲取患者的腫瘤組織，并需要在體外培養(yǎng)3~6周，而擴(kuò)增治療所需細(xì)胞數(shù)有限，且離體TIL易發(fā)生活性改變。,,,,CIKCell,TILCell,LAK Cell,,,,,來(lái)源,制備,抗瘤活性,副作用,外周血單個(gè)核細(xì)胞+抗CD3單抗+IL-2、IFN,外周血單個(gè)核細(xì)胞+IL-2,腫瘤組織內(nèi)淋巴細(xì)胞+IL-2,可大量擴(kuò)增,不易大量擴(kuò)增,細(xì)胞來(lái)源困難、不易擴(kuò)增,最強(qiáng)、廣譜,最差，狹窄,次之，特異性,低,低

11、,較大,CIK、LAK、TIL比較,,第一天,第二天,每八天,抽患者外周血30~50mL,分離收集單個(gè)核細(xì)胞，加入培養(yǎng)液及1 000U／ml IFN-r, 100U／ml IL-1 20µL,加入1 000U／ml IL-2µL、50ng／ml的CD3單抗30µL。置37°C 5％的C02條件下培養(yǎng),,,,補(bǔ)加IL-2的同時(shí)再補(bǔ)加CD3單抗15ul/ml,CIK制備方法,,,CIK制備回輸,培養(yǎng)兩

12、周后開(kāi)始收集CIK細(xì)胞，生理鹽水洗滌3次，加入10%人血白蛋白、300U IL-2，用生理鹽水配成100ml后靜脈回輸，隔天回輸1次，分3次輸完，每次回輸109細(xì)胞以上，回輸前均作菌檢及細(xì)菌培養(yǎng)。,第0天、第七天、及第十四天取細(xì)胞用臺(tái)盼藍(lán)拒染法記數(shù)，第15天收獲細(xì)胞用FCM測(cè)定CD3+CD56+細(xì)胞百分?jǐn)?shù),CIK制備回輸,CIK可來(lái)源自體、異體和臍血。,,,,分泌多種細(xì)胞因子。不僅抑制腫瘤生長(zhǎng)；同時(shí)通過(guò)調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)間接殺傷腫瘤細(xì)胞,釋放

13、顆粒酶、穿孔素而裂解靶細(xì)胞,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及壞死,,,,殺傷腫瘤細(xì)胞,CIK作用機(jī)制,CIK作用機(jī)制,,,適應(yīng)癥,,,禁忌癥,放化療誘導(dǎo)緩解后的腫瘤患者 多藥耐藥的腫瘤細(xì)胞骨髓移植后免疫治療晚期腫瘤病人,CIK細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感，不能與化療同時(shí)應(yīng)用IL-2過(guò)敏患者，不能用CIK細(xì)胞治療。,臨床應(yīng)用CIK治療的適應(yīng)癥與禁忌癥,放化療誘導(dǎo)緩解后的腫瘤患者,,,01,CIK細(xì)胞可以在不損傷機(jī)體免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的前提下，直接殺傷腫瘤

14、細(xì)胞，調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，因而成為腫瘤手術(shù)、放療、化療的重要輔助手段。在放療、化療后間隔2～4周，機(jī)體免疫力有所恢復(fù)時(shí)，輸入CIK細(xì)胞，可提高腫瘤患者的緩解率 。在清除微小殘留病灶方面，CIK細(xì)胞也發(fā)揮著重要作用。,臨床應(yīng)用CIK治療的適應(yīng)癥,,,02,對(duì)多藥耐藥腫瘤細(xì)胞的影響,腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的耐受性是許多惡性腫瘤治療的主要障礙Schmidt Wolf等 研究證實(shí)對(duì)柔紅霉素耐藥的K562細(xì)胞對(duì)CIK細(xì)胞較敏感，這表明CIK細(xì)胞

15、對(duì)惡性克隆形成的抑制作用與多藥耐藥基因的表達(dá)無(wú)關(guān)，這一發(fā)現(xiàn)為克服化療誘導(dǎo)的藥物耐藥提供了一個(gè)有效的治療前景。,臨床應(yīng)用CIK治療的適應(yīng)癥,,03,,骨髓移植后免疫治療,骨髓移植可以使白血病患者得到根治，但無(wú)論是異體移植或自體骨髓移植，都存在一定的復(fù)發(fā)率。CIK細(xì)胞從白血病患者體內(nèi)取出培養(yǎng)后，在體內(nèi)外有很強(qiáng)的殺傷K562細(xì)胞、裂解急性髓系白血病細(xì)胞的作用，可提高自體移植后免疫治療作用，降低復(fù)發(fā)率。,臨床應(yīng)用CIK治療的適應(yīng)癥,,04,,

16、晚期腫瘤病人,傳統(tǒng)的手術(shù)，放、化療無(wú)法耐受，應(yīng)用CIK細(xì)胞治療可以改善生活質(zhì)量，延長(zhǎng)生存期。,臨床應(yīng)用CIK治療的適應(yīng)癥,,,,,目的：觀察放化療后的腫瘤患者回輸CIK細(xì)胞后生活質(zhì)量及細(xì)胞免疫功能變化，探討CIK細(xì)胞回輸對(duì)放化療后的腫瘤患者的治療作用。,臨床應(yīng)用,實(shí)驗(yàn)組抽取CIK細(xì)胞回輸治療，檢測(cè)外周血細(xì)胞免疫指標(biāo)并比較CIK細(xì)胞回輸治療后生活質(zhì)量改善情況,放化療治療后的腫瘤患者31例為實(shí)驗(yàn)組，正常人14例作對(duì)照組,CIK細(xì)胞的臨床應(yīng)用

17、,,,,上述指標(biāo)較治療前相比有改善(P<0.05),與正常人相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),生活質(zhì)量評(píng)分均較治療前明顯改善(P<0.05),,結(jié)論：放化療后的腫瘤患者免疫功能下降，而CIK細(xì)胞回輸治療安全可靠，可以改善放化療后腫瘤患者近期免疫功能及生活質(zhì)量，可作為放化療后腫瘤患者輔助治療的一種選擇。,[Image Info] www.wizdata.co.kr - Note to cus

18、tomers : This image has been licensed to be used within this PowerPoint template only. You may not extract the image for any other use.,,結(jié)果：放化療后的腫瘤患者外周血CD3+、CD4+細(xì)胞百分率下降，CD8+細(xì)胞百分率上升；CD4+／CD8+比值下調(diào)，CD16+CD56+細(xì)胞減少,CIK細(xì)胞的臨床應(yīng)

19、用,,,,選擇110例晚期實(shí)體瘤患者，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（ DCs ），制備CIK細(xì)胞,,方法,,,結(jié)果,結(jié)論,42例可評(píng)價(jià)病灶的患者中，2例完全緩解(CR)、9例部分緩解(PR)、15例疾病穩(wěn)定(SD)。37例不可評(píng)價(jià)病灶的患者中，25例患者有效。與治療前相比，治療后免疫功能及腫瘤標(biāo)志物有一定程度改善,DCs．CIK細(xì)胞聯(lián)合治療晚期惡性實(shí)體瘤安全有效，具有一定的臨床應(yīng)用前景,目的：研究樹(shù)突狀細(xì)胞和CIK聯(lián)合治療晚期實(shí)體瘤的臨床

20、療效,CIK細(xì)胞的臨床應(yīng)用,,有研究對(duì)9名腎透明細(xì)胞癌患者進(jìn)行cik治療并隨訪4年發(fā)現(xiàn)患者體內(nèi)T細(xì)胞亞群比例由治療前的抑制狀態(tài)恢復(fù)到正常水平,一定程度地提高了患者機(jī)體對(duì)抗腫瘤的能力，所有患者均未見(jiàn)復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移?,CIK細(xì)胞的臨床應(yīng)用,,,,觀察和分析cik細(xì)胞過(guò)繼免疫療法對(duì)多種中晚期惡性腫瘤的臨床療效,,目的,,,結(jié)果,結(jié)論,256例接受cik細(xì)胞治療患者中總緩解率為80.86%,1年生存期為96.09%,2年生存期為92.96%

21、3年生存期為88.28%,cik細(xì)胞過(guò)繼免疫療法能明顯地提高患者免疫功能,減輕臨床癥狀,提高生活質(zhì)量,延長(zhǎng)生存期?,CIK細(xì)胞的臨床應(yīng)用,鮑鋒等實(shí)驗(yàn)結(jié)果,,,,,發(fā)熱38 ℃左右,體溫超過(guò)39℃,體溫在38℃左右，多數(shù)可自行緩解，也可給予解熱鎮(zhèn)痛藥退熱?,如果患者在輸注過(guò)程中體溫超過(guò)39℃，應(yīng)立即停止治療，尋找原因并及時(shí)處理,發(fā)熱處理,,目前認(rèn)為生物治療中患者中度發(fā)熱是機(jī)體免疫功能正常反應(yīng)的結(jié)果，該反應(yīng)對(duì)治療有益?其它少見(jiàn)的副作用有胸

22、悶和惡心，尚未出現(xiàn)如過(guò)敏,肝腎衰竭等其他不良反應(yīng)?,CIK治療最常見(jiàn)的副作用是發(fā)熱,CIK治療的副作用,,每次輸注CIK細(xì)胞數(shù)量、輸注次數(shù),,制備需要一定條件,,制備標(biāo)準(zhǔn)化及質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)尚未制定,,治療療效的觀察指標(biāo),,治療療效觀察時(shí)間,CIK治療存在的問(wèn)題,,理論上CIK可用于各種期別的惡性腫瘤，但術(shù)后用于抗復(fù)發(fā)治療還是晚期病人效果更好不清楚,,如何與其他治療手段配合使用,,目前CIK臨床研究均沒(méi)有進(jìn)行隨機(jī)對(duì)照，樣本量小,,理論上CI