MIF通過ERK信號通路對肝癌細胞增殖的實驗研究.pdf

1、目的：從細胞層面上研究MIF通過ERK信號途徑促進肝癌細胞增殖的分子機制，為進一步研發(fā)以MIF為靶點治療HCC的藥物研發(fā)建立理論基礎。
　　方法：首先，將MIF(50 ng/ml，100 ng/ml，200 ng/ml)加入肝癌細胞HepG2作為實驗組,MIF(50 ng/ml，100 ng/ml，200 ng/ml)加入肝硬化細胞QSG-7701和正常肝細胞L-02中作為對照組,將MIF拮抗劑ISO-1(50μM)加入肝癌細胞H

2、epG2中作為陰性對照組，各組細胞設一組空白對照組，只加入培養(yǎng)基。通過MTT法檢測HepG2細胞存活率來篩選MIF最佳濃度。其次，培養(yǎng)各組細胞24 h后收集細胞，用Real time-PCR檢測各組細胞ERK基因表達，用 Western-blot法檢測各組細胞ERK蛋白表達及其磷酸化水平（p-ERK）。
　　結果：1.MIF具有明顯促進細胞增殖作用，在HepG2作用最為顯著；2.MTT法可得出在同一時間，隨著濃度升高MIF促增殖作

3、用逐漸增強，濃度為200ng/ml時細胞增殖最顯著，在HepG2作用更為顯著；3.Real time-PCR檢測結果可見與對照組相比，ERK基因表達量是上調的，在MIF濃度最大時（200 ng/ml）ERK基因的表達與低濃度組及對照組相比增多最為顯著（P<0.05），HepG2與QSG-7701、L-02比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），QSG-7701與L-02比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。Western-blot結果提

4、示不同濃度MIF組ERK蛋白表達無明顯差異，而p-ERK的表達是上調的，其中MIF濃度為200 ng/ml時p-ERK蛋白表達較低濃度組及對照組明顯增多（P<0.05），HepG2與QSG-7701、L-02比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），QSG-7701與L-02比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；4.ISO-1通過抑制MIF表達，下調ERK信號通路蛋白表達，抑制HepG2細胞增殖，Real time-PCR檢測顯示與MIF