肝星狀細(xì)胞通過AKT信號(hào)通路促進(jìn)小鼠肝癌細(xì)胞增殖.pdf

1、背景目的：原發(fā)性肝細(xì)胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)作為一個(gè)世界性的醫(yī)學(xué)難題，正以其高發(fā)病率、高轉(zhuǎn)移侵襲力和高病死率時(shí)時(shí)刻刻威脅著人類健康。原發(fā)性肝細(xì)胞癌位居難治性惡性腫瘤前五，肝細(xì)胞癌發(fā)病率正逐年升高。肝癌微環(huán)境作為腫瘤免疫治療的新方向，正逐漸走入人們的視野，在癌癥發(fā)生發(fā)展中，肝癌微環(huán)境起了重要作用，通過采用各種手段影響肝癌微環(huán)境達(dá)到抑制肝癌發(fā)生發(fā)展的目的為原發(fā)性肝細(xì)胞癌的治療提供了新的思路。越來(lái)越多的證

2、據(jù)顯示HCC的發(fā)生發(fā)展與其所處的肝癌微環(huán)境有著緊密聯(lián)系。肝星狀細(xì)胞(Hepaticstellatecells，HSCs)是間質(zhì)細(xì)胞的一種，廣泛存在于人體肝臟組織中，其在肝臟受到病理因素侵襲時(shí)會(huì)發(fā)生活化，參與各種病理過程，同時(shí)也參與組成肝癌的微環(huán)境，影響細(xì)胞外基質(zhì)的代謝，與原發(fā)性肝癌的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)旨在探討活化肝星狀細(xì)胞在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)中對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響及其產(chǎn)生作用的機(jī)制，為后續(xù)繼續(xù)探討HSCs在生物學(xué)、免疫學(xué)相關(guān)領(lǐng)域

3、的作用，以及以HSCs為靶標(biāo)的肝癌治療方法提供實(shí)驗(yàn)及理論基礎(chǔ)。
　　實(shí)驗(yàn)方法：選取生長(zhǎng)情況相同的BALB/c雄性小鼠，并將其隨機(jī)分為兩組，并在兩組小鼠肝包膜下分別注射小鼠肝癌細(xì)胞H22及H22+HSCs，構(gòu)建小鼠原位肝癌移植模型，10天后處死荷瘤小鼠，收集對(duì)照組小鼠和共移植組小鼠的肝臟腫瘤組織。通過Westernblot技術(shù)檢測(cè)兩組小鼠腫瘤組織中ERK、AKT信號(hào)通路的表達(dá)情況。收集所培養(yǎng)的小鼠肝星狀細(xì)胞的上清液，過濾純化后制成條

4、件培養(yǎng)基(Conditionedmedia，CM)，在體外實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)HSCs對(duì)H22細(xì)胞增殖的影響及其與AKT信號(hào)通路之間的關(guān)系，并使用另一種小鼠成纖維細(xì)胞NIH3T3作為對(duì)照，最后，我們將用2種CM處理過的H22細(xì)胞分別接種到BALB/c雄性小鼠皮下，觀察皮下腫瘤的生長(zhǎng)情況。
　　結(jié)果：我們?cè)谛∈篌w內(nèi)肝癌模型中穩(wěn)定的模擬了HSCs在體內(nèi)對(duì)HCC的影響;在體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了接受HSCs處理的H22細(xì)胞的增殖能力均明顯提高，差異

5、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;同時(shí)，HSCs處理后的H22細(xì)胞AKT信號(hào)通路下游蛋白β-catenin-CyclinD2和GSK3β-CyclinD1的表達(dá)明顯升高，在加入AKT信號(hào)通路特異性阻斷藥物L(fēng)Y294002后，H22細(xì)胞的AKT信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)與增殖能力均受到明顯抑制。
　　結(jié)論：在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中證明，HSCs均能通過激活H22細(xì)胞AKT信號(hào)通路的方式促進(jìn)H22細(xì)胞增殖;這種激活能力具有一定的特異性，這對(duì)于后續(xù)開展HSCs相關(guān)研究