SARI通過抑制Src-Akt-Erk信號通路抑制雌激素誘導的肺腺癌細胞增殖.pdf

1、目的:
　　肺癌位列所有惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率的第一位，就病因?qū)W來說至今卻未被完全理解。近年來女性肺癌發(fā)病率增長明顯，并且在患病年齡、發(fā)病時間、組織類型及生存期等方面存在顯著的性別差異，這可能與性激素及其受體的作用相關。研究顯示雌激素促進肺癌的增殖。因此對于女性病人需要考慮更佳個體化的治療。臨床試驗證實抗雌激素治療加靶向治療對一些肺癌患者效果明顯。但是其具體機制還不甚明了，有待更進一步的深入研究。SARI(Suppressor o

2、fAP-1，regulated by IFN)是近年新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，它能抑制轉(zhuǎn)錄因子AP-1，90％的人類癌癥中都存在AP-1活性增高。將SARI遞送到癌細胞，可抑制癌細胞增殖，促進細胞凋亡。由于90％的癌癥都基于相似機制來存活和生長，所以SARI被認為可能成為多種癌癥治療的有效分子靶點。本課題小組的前期研究結(jié)果顯示SARI與肺腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移有明顯的關系，SARI能通過調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)化現(xiàn)象(EMT)，從而抑制肺腺癌的侵襲與轉(zhuǎn)移。但對于S

3、ARI是否能抑制肺腺癌細胞中雌激素的促增殖作用從而抑制肺腺癌的增殖與轉(zhuǎn)移卻從未被研究過。本實驗擬探究SARI與肺腺癌細胞中雌激素信號通路的關系。
　　方法:
　　通過轉(zhuǎn)染真核重組質(zhì)粒pcDNA-SARI的方法在肺腺癌細胞A549中過表達SARI蛋白，噻唑藍(MTr)比色法觀察雌激素處理前后細胞增殖情況，Westernblotting法檢測雌激素誘導的細胞增殖信號通路中相關蛋白Src，Akt及Erk的表達及活化情況。
　

4、　結(jié)果:
　　1.將pcDNA-SARI與相應空載體(pcDNA-Vec)轉(zhuǎn)染A549細胞，Westernblotting法檢測SARI蛋白表達。結(jié)果顯示，肺腺癌細胞A549中SARI極低表達。往肺腺癌細胞A549中轉(zhuǎn)染入真核重組表達質(zhì)粒pcDAN-SARI后，與空白組及空載體對照組(Control vector組)相比，pcDNA-SARI組SARI蛋白表達明顯增強，成功建立高表達SARI A549細胞模型，為下一步有關SARI

5、抑制雌激素誘導的肺腺癌增殖機理的研究奠定了基礎，也使后續(xù)工作成為可能。
　　2.使用MTT法檢測細胞增殖能力。雌激素(E2)組增殖率為(148±10)％，細胞增殖率與對照組（Control vector組）相比較，上升48％（*P＜0.05），雌激素促進肺腺癌細胞的增殖;雌激素(E2)+pcDNA-SARI組增殖率為(92±4)％，即過表達SARI后再用雌激素處理，相比較雌激素(E2)組，細胞增殖率下降56％（**P＜0.05）。

6、pcDNA-SARI組增殖率為(68±6)％。說明SARI抑制雌激素誘導的肺腺癌細胞增殖。
　　3.Western blotting法檢測各組中Src蛋白的表達情況。用雌激素處理后，pSrcy416表達增強，相對表達量為2.59±0.36，而總Src表達不變;但是當過表達SARI后，再用雌激素處理，pSrcy416表達下調(diào)，相對表達量為0.88±0.22，總Src表達不變。兩組pSrcy416蛋白表達量差異有統(tǒng)計學意義（*P＜0.

7、05）。說明SARI抑制雌激素誘導的肺腺癌細胞A549 Src蛋白的磷酸化。
　　4.Western blotting法檢測各組中Akt的表達情況。予雌激素處理后，pAkts473表達增強，相對表達量為2.77±0.48，而總Akt表達不變;但當過表達SARI后再予雌激素處理， pAkts473表達下調(diào)，相對表達量為0.86±0.21，而總Akt表達不變。兩組pAkts473蛋白表達量差異有統(tǒng)計學意義（*P＜0.05）。說明SAR

8、I能抑制雌激素誘導的肺腺癌細胞A549 Akt蛋白的磷酸化。
　　5.Western blotting法檢測各組Erk蛋白的表達情況。予雌激素處理后，pErk蛋白表達增強，相對表達量為3.48±0.47，而Ekr2總蛋白表達不變;但當過表達SARI后再給予雌激素處理，pErk表達下調(diào)，相對表達量為0.91±0.09，而Ekr2總蛋白表達不變。兩組pErk蛋白表達量差異有統(tǒng)計學意義(*P＜0.05)。說明SARI抑制雌激素誘導的肺腺

9、癌細胞A549 Erk蛋白的磷酸化。綜合以上實驗結(jié)果，說明SARI抑制肺腺癌細胞中雌激素誘導的Src-Akt-Erk信號通路的活化。
　　結(jié)論:
　　1.在肺腺癌A549細胞中，SARI極低表達。當將pcDNA-SARI轉(zhuǎn)染入A549細胞，pcDNA-SARI組SARI蛋白表達明顯增強，成功在A549細胞中過表達SARI。
　　2.雌激素促進肺腺癌細胞的增殖，SARI不僅能抑制肺腺癌細胞的增殖，而且能抑制雌激素誘導的肺

10、腺癌細胞增殖。
　　3.雌激素促進肺腺癌增殖其相關機制可能與雌激素激活Src-Akt-Erk信號通路有關。SARI能夠抑制雌激素誘導的肺腺癌細胞增殖，潛在的機制可能是通過抑制肺腺癌細胞中Src-Akt-Erk信號通路活化。本研究不僅豐富了我們對雌激素促肺癌增殖作用的分子機制的認識，也促進對SARI抑制肺癌生長增殖相關機制的認識，為SARI成為肺癌治療分子靶點提供一些理論依據(jù)。但目前只是初步研究，臨床的應用尚需要大量研究進一步證實。