γ分泌酶抑制劑阻斷Notch信號通路對肺腺癌細胞A549增殖的影響.pdf

1、背景：在全世界，肺癌在惡性腫瘤死因中占第一位。積極研究肺癌的發(fā)病機制，尋求新的治療方法，尤為迫切。近來，Notch信號通路與肺癌之間的關系受到關注。目前，多認為Notch1、Notch3蛋白在非小細胞肺癌組織中表達比較常見，低氧條件下，Notch1信號可促進非小細胞肺癌增殖及存活。肺腺癌是非小細胞肺癌中的一種常見病理類型，Notch1-4各亞型在肺腺癌細胞上的表達情況還不明確，Notch1信號通路在正常氧條件下對肺腺癌細胞增殖是否有影響

2、，有待進一步研究。
　　目的：檢測Notch1-4各亞型在肺腺癌細胞A549上的表達情況，并通過γ分泌酶抑制劑MW167阻斷Notch受體蛋白在A549細胞上活化，觀察MW167在正常氧條件下對A549細胞增殖的影響。探討Notch1信號通路在正常氧條件下對肺腺癌A549增殖的影響，圍繞Notch1信號通路，為肺腺癌的防治提供理論依據(jù)。
　　方法：體外培養(yǎng)人肺腺癌細胞A549，通過Western-blot及RT-PCR方法檢

3、測Notch受體各亞型表達情況；在正常氧條件下，不同濃度（5μM、10μM、20μM）MW167處理肺腺癌細胞A549，48小時后，通過Western-blot方法檢測Notch1蛋白表達的變化；不同濃度（5μM、10μM、20μM）MW167處理肺腺癌細胞A549，48小時后，通過RT-PCR方法檢測Notch信號通路下游基因HES1 mRNA表達的變化；不同濃度（5μM、10μM、20μM）MW167處理肺腺癌細胞A549，48小時

4、后，應用MTT法檢測MW167對細胞增殖的影響。實驗數(shù)據(jù)應用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件處理。
　　結果：通過Western-blot方法及RT-PCR方法證實Notch1-4各亞型在A549細胞均有表達。在正常氧條件下，不同濃度（5μM、10μM、20μM）MW167處理肺腺癌細胞A549，48小時后，各加藥組與對照組相比，Notch1蛋白表達升高（P<0.05），隨著MW167濃度增加，Notch1蛋白積累增加率沒有明顯相應增

5、加（r=0.2，P>0.05）；不同濃度（5μM、10μM、20μM）MW167處理肺腺癌細胞A549，48小時后，各加藥組與對照組相比，HES1 mRNA表達下降（P<0.05），隨MW167濃度增加，對HES1 mRNA表達的抑制率逐漸增加（r=0.927，P<0.01）；不同濃度（5μM、10μM、20μM）MW167處理肺腺癌細胞A549，48小時后，MTT法檢測各加藥組吸光度A值比對照組高（P<0.05），隨濃度增加，增值率相

6、應增加（r=0.904，p<0.01）。結論：1．Notch受體各亞型在肺腺癌A549細胞中均有表達，為進一步研究Notch信號通路與肺腺癌A549的關系提供前提。
　　2．在正常氧條件下，不同濃度（5μM、10μM、20μM）MW167處理肺腺癌細胞A549，48小時后，Notch1蛋白表達增加，而下游基因HES1 mRNA表達減少，說明MW167不同程度阻斷Notch1蛋白酶切活化，使Notch1蛋白積累，表達增加，而下游基因