過表達hepaCAM下調AKT-FOXO信號通路抑制膀胱癌細胞的增殖.pdf

1、本文對過表達hepaCAM下調AKT/FOXO信號通路抑制膀胱癌細胞的增殖進行了研究。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：hepaCAM和FOXO3在膀胱癌中的表達及相關性。
　　目的：收集臨床標本研究肝細胞粘附分子(hepaCAM)和叉頭框轉錄因子O亞族3(FOXO3)在膀胱癌(BCa)中的表達及相關性。
　　方法：收集22例膀胱癌患者癌組織標本和14例癌旁正常組織標本，免疫組織化學染色法(IHC)檢測hepaCAM

2、和FOXO3的表達量。正置顯微鏡下成像，統(tǒng)計學方法分析hepaCAM和FOXO3蛋白在膀胱癌中的表達量與各種臨床參數(shù)之間的關系以及二者表達量相關性。
　　結果：hepaCAM和FOXO3在膀胱癌中均顯示出表達缺失的現(xiàn)象，在癌旁正常組織中高表達。統(tǒng)計分析得出，hepaCAM和FOXO3在膀胱癌中的表達呈負相關性（r=0.898, p<0.01），而其二者與相關臨床參數(shù)無關(p>.05)。
　　結論：FOXO3蛋白在膀胱癌組織中

3、表達減低，且與hepaCAM的表達正相關，這一結果為hepaCAM對FOXO3在膀胱癌中的調節(jié)關系的探究奠定了臨床實驗基礎。
　　第二部分：hepaCAM下調AKT/FOXO抑制膀胱癌細胞增殖機制。
　　目的：研究過表達hepaCAM基因在膀胱癌細胞中對AKT/FOXO信號分子以及增殖相關蛋白的調節(jié)作用，并且用AKT信號的小分子抑制劑 LY294002與 hepaCAM過表達腺病毒聯(lián)合使用，進一步發(fā)現(xiàn)hepaCAM通過AKT

4、/FOXO阻止膀胱癌T24、BIU-87細胞株增殖及生長活性的分子信號機制。
　　方法：利用Western blot驗證過表達hepaCAM時p-AKT, p-FOXO1和p-FOXO3及增殖相關蛋白CDK2和PCNA表達改變；細胞免疫熒光（IF）檢測FOXO3在膀胱癌T24, BIU-87細胞株核漿的定位情況，同時用 western blot進行定量驗證。噻唑藍(MTT)法鑒定 LY294002對BIU-87、T24細胞生長活力

5、的影響，并且檢測hepaCAM與LY294002聯(lián)合運用時膀胱癌細胞的生長抑制情況；克隆形成檢測 hepaCAM與LY294002聯(lián)用對膀胱癌細胞 BIU-87、T24增殖的影響；Western blot實驗檢測hepaCAM和LY294002聯(lián)用p-AKT、p-FOXO1、p-FOXO3、CDK2和PCNA的表達改變，統(tǒng)計定量分析結果。
　　結果：在膀胱癌T24、BIU-87細胞中，過表達hepaCAM明顯減弱p-AKT, p-

6、FOXO1, p-FOXO3以及小分子蛋白CDK2和PCNA的表達（P<0.05）；細胞免疫熒光及 western blot結果證明，hepaCAM促進FOXO3的核轉位，使FOXO3在細胞核中的表達量升高而在細胞漿中減弱。隨著LY294002濃度的增加和處理時間的延長，膀胱癌BIU-87、T24細胞的生長明顯被抑制，而 hepaCAM與 LY294002聯(lián)用較hepaCAM或LY294002單獨使用更加顯著地抑制了細胞的增長；克隆形成