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1、目的:研究蟲(chóng)草素在膽囊癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能;篩選蟲(chóng)草素在膽囊癌細(xì)胞中的作用靶點(diǎn);探討該作用靶點(diǎn)在膽囊癌組織和細(xì)胞的表達(dá)及生物學(xué)功能和機(jī)制。
方法:通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)初步驗(yàn)證蟲(chóng)草素是否有抑制膽囊細(xì)胞的作用并篩選藥物濃度。通過(guò)增殖、克隆形成、凋亡、周期分布、線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)蟲(chóng)草素對(duì)膽囊癌細(xì)胞GBC-SD和N O Z的生物學(xué)功能影響;通過(guò)Westemblot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)相關(guān)蛋白的變化,初步探討蟲(chóng)草素的作用機(jī)制;通過(guò)裸小鼠皮下瘤模
2、型檢測(cè)蟲(chóng)草素體內(nèi)對(duì)膽囊癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。再通過(guò)基因芯片篩選蟲(chóng)草素作用前后膽囊癌細(xì)胞基因差異表達(dá),篩選蟲(chóng)草素的作用靶點(diǎn),免疫組織化學(xué)染色、qRT-PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該靶點(diǎn)在膽囊癌組織和細(xì)胞中表達(dá)水平。通過(guò)siRNA干擾該靶基因,CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)、克隆形成、劃痕愈合、Transwell小室侵襲、裸小鼠皮下成瘤能力、Westernblot實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)該祀點(diǎn)體內(nèi)、外兌膽囊癌細(xì)胞的生物學(xué)功能的影響及可能的信號(hào)通路。并過(guò)表達(dá)該基因,探討是否可阻斷
3、或者削弱蟲(chóng)草素對(duì)膽囊癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
結(jié)果:蟲(chóng)草組的最佳作用濃度為GBC-SD細(xì)胞:(0,100,200,400,800μg/ml; NOZ細(xì)胞:0,10,0,10,20,40,60μg/ml.以上濃度作用后,膽囊癌細(xì)胞增殖、克隆形成能力明顯下降,凋亡細(xì)胞數(shù)量顯著增加,周期分布S期細(xì)胞數(shù)明顯增多,線(xiàn)粒體膜電位顯著下降,凋亡和周期蛋白發(fā)生異常,NOZ細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力明顯下降?;蛐酒Y選顯示LASP-1可能是蟲(chóng)草素作用靶
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