As2O3調(diào)節(jié)膀胱癌細(xì)胞表達(dá)Cx43蛋白及其信號(hào)通路的研究.pdf

1、目的：
　　泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中膀胱尿路上皮癌是最為常見的一種，術(shù)后常規(guī)應(yīng)用膀胱灌注治療預(yù)防復(fù)發(fā)。目前膀胱癌膀胱灌注化療5年內(nèi)復(fù)發(fā)率較高。因此，研究新的藥物聯(lián)合治療，對(duì)提高膀胱癌患者的完全緩解率極其預(yù)后有著極其重要的意義。
　　三氧化二砷（Arsenic trioxide，As2O3）是臨床常用的一種抗腫瘤藥物。氧化應(yīng)激反應(yīng)是其抗腫瘤的主要作用途徑之一。氧化應(yīng)激反應(yīng)可使Cx43半通道開放。近年來研究表明As2O3治療膀胱癌臨床

2、療效確切。其作用機(jī)制及信號(hào)通路的研究具有重要的臨床意義和科學(xué)價(jià)值。
　　細(xì)胞縫隙連接屬于一種跨膜通道結(jié)構(gòu)，具有通透特性，由兩個(gè)細(xì)胞縫隙連接蛋白六聚體互相對(duì)接形成。其中Cx43在細(xì)胞表面表達(dá)分布最廣且與腫瘤的關(guān)系最密切，在多種惡性腫瘤細(xì)胞中Cx43的表達(dá)下調(diào)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)。在膀胱癌組織中的研究證實(shí)Cx43蛋白在癌旁正常膀胱組織中呈高表達(dá)，在膀胱尿路上皮癌細(xì)胞中低表達(dá)。PKC抑制劑Go6976可使膀胱癌細(xì)胞低表達(dá)的Cx4

3、3上調(diào)，重建細(xì)胞縫隙連接，并可抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移。Cx43的基因突變極少見，其表達(dá)及功能的調(diào)控主要在轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平進(jìn)行。在膀胱癌細(xì)胞中As2O3調(diào)節(jié)膀胱癌細(xì)胞Cx43蛋白表達(dá)的信號(hào)通路，尚未見相關(guān)報(bào)道。
　　為探討As2O3在膀胱癌治療中的作用機(jī)制，我們將選取BIU-87細(xì)胞系，體外研究As2O3對(duì)Cx43的表達(dá)的影響，并進(jìn)一步探討其是否通過激活p38MAPK、AKT及NF-κB等信號(hào)通路調(diào)節(jié)Cx43表達(dá)。
　　方法：<

4、br>　　1、細(xì)胞培養(yǎng):BIU-87細(xì)胞用含10％胎牛血清和1％青霉素/鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基，置于37℃，含5％ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　2、CCK8法檢測(cè)BIU-87細(xì)胞增殖:不同濃度(0、0.5、1、2.5、5、10、20、30、40 umol/L) AszO3作用BIU-87細(xì)胞24、48和72小時(shí)，CCK8法檢測(cè)As2O3對(duì)細(xì)胞增殖的影響。應(yīng)用As2O3最適濃度作用于BIU-87細(xì)胞1、1.5、3、6、12和2

5、4小時(shí)。
　　3、Western blot檢測(cè)As2O3作用BIU-87細(xì)胞后Cx43的表達(dá)情況。
　　4、Western blot檢測(cè)特異性阻斷劑SB230580(10μM)、LY294002(10μM)、PDTC(100μM)分別作用于BIU-87細(xì)胞后，As2O3作用于BIU-87細(xì)胞后，Cx43的表達(dá)情況。
　　5、特異性阻斷劑SB230580(10μM)、LY294002(10μM)、PDTC(100μM)分

6、別作用于BIU-87細(xì)胞后，As2O3作用于BIU-87細(xì)胞后，Western blot檢測(cè)BIU-87細(xì)胞AKT的磷酸化情況。
　　結(jié)果：
　　1、CCK8法結(jié)果顯示，As2O3可抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，呈一定濃度時(shí)間依賴關(guān)系。
　　2、Western blot結(jié)果顯示，As2O3作用于BIU-87細(xì)胞后，其表達(dá)Cx43明顯增加。提前分別加入特異性阻斷劑SB230580(10μM)、LY294002(10μM)、PDTC(

7、100μM)后，As2O3上調(diào)Cx43的作用可被LY294002、PDTC阻斷。SB230580組與As2O3組比無明顯差異。
　　3、Western blot結(jié)果顯示，特異性阻斷劑SB230580(10μM)、LY294002(10μM)、PDTC(100μM)分別作用于BIU-87細(xì)胞后，As2O3作用于BIU-87細(xì)胞后，LY294002、PDTC組與As2O3組相比，磷酸化AKT蛋白表達(dá)明顯降低。SB230580組與As2