白藜蘆醇調(diào)節(jié)膀胱癌中ARHI的表達(dá)及其對(duì)JAK-STAT3信號(hào)通路的影響.pdf

1、背景與目的:作為泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤，膀胱癌在美國(guó)男性中為排名第四的常見腫瘤，并在癌癥患者中，膀胱癌的死亡率排名第八，且男性發(fā)病率與女性的比例大約為3∶1。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2014年美國(guó)新增膀胱癌患者74960例，因其死亡人數(shù)為15580例，在我國(guó)2014年，膀胱癌的發(fā)病率為6.61/10萬(wàn)，死亡率為2.53/10萬(wàn)，且呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)。大約百分之六十的膀胱癌患者發(fā)病年齡在65歲左右。
　　膀胱癌是發(fā)生于膀胱黏膜的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，

2、癌癥類型主要分為尿路上皮癌，鱗癌，腺癌。其中90％為尿路上皮癌(移行細(xì)胞癌)，3％-7％為鱗癌，2％為腺癌。在移行細(xì)胞癌中約70％-85％為淺表性膀胱癌，也稱其為非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌(non-muscle invasive bladder cancer，NMIBC)，包括Ta，T1，Tis期。盡管經(jīng)過(guò)尿道膀胱腫瘤切除術(shù)(transurethral resection of bladder tumor，TURBT)治療，也有50％-70％的

3、患者會(huì)復(fù)發(fā)，并且10％-30％的復(fù)發(fā)患者會(huì)發(fā)展為肌層浸潤(rùn)性膀胱癌(muscle invasive bladder cancer)。而15％-30％的移行細(xì)胞癌為肌層浸潤(rùn)性膀胱癌，包括T2-T4期。肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者的預(yù)后極差，大約50％的患者在5年內(nèi)死于膀胱癌。為了預(yù)防和降低膀胱癌的復(fù)發(fā)以及其進(jìn)一步的惡化，膀胱內(nèi)化療以及免疫治療被廣泛應(yīng)用于淺表性膀胱癌患者術(shù)后的治療中。但目前臨床上所使用的各種化療藥物療效有限且能造成局部損傷，并產(chǎn)生毒

4、副作用。因此，尋求一種有效且無(wú)毒副作用的膀胱癌化療藥物具有重要意義。
　　白藜蘆醇(Resveratrol，Res)，是一種藥用價(jià)值極高的天然多酚化合物，主要存在于漿果、葡萄、花生等植物中。研究發(fā)現(xiàn)它在抗衰老，抗炎癥，抗癌，抗氧化以及保護(hù)心血管方面有著重要作用，且無(wú)毒副作用?，F(xiàn)已有研究證明白藜蘆醇對(duì)卵巢癌、胃癌、髓母細(xì)胞瘤、乳腺癌等癌細(xì)胞的生長(zhǎng)有一定的抑制作用，因而白藜蘆醇能否作為一種新型的抗癌藥物受到了廣泛的關(guān)注。在不同的腫瘤細(xì)

5、胞中，白藜蘆醇抗腫瘤的內(nèi)在分子機(jī)制也不盡相同。已有研究表明，白藜蘆醇能通過(guò)影響多條信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制，如Wnt、JAK/STAT3、Notch等信號(hào)通路。本實(shí)驗(yàn)室前期研究已證實(shí)白藜蘆醇能通過(guò)調(diào)控JAK/STAT3信號(hào)通路來(lái)抑制膀胱癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。
　　ARHI(aplasia ras homologue memberⅠ)，是一種母源性印記抑癌基因，位于人染色體lp31，編碼一個(gè)26kDa的蛋白。據(jù)研究表明，在腫瘤的發(fā)

6、生發(fā)展過(guò)程中，ARHI能夠參與多種途徑來(lái)發(fā)揮抑癌作用，其中就包括調(diào)控JAK/STAT3信號(hào)通路，調(diào)控腫瘤細(xì)胞的自噬活動(dòng)。然而在膀胱癌中ARHI的表達(dá)情況及其相關(guān)抑癌機(jī)制卻未見報(bào)道，因此本實(shí)驗(yàn)將在本實(shí)驗(yàn)室的研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究白藜蘆醇處理膀胱癌后ARHI的表達(dá)情況以及與ARHI相關(guān)的抑癌途徑。
　　方法:利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)膀胱癌組織以及癌旁正常組織中ARHI的表達(dá)情況，并應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件分析ARHI在膀胱癌以及癌旁正常組織中的表達(dá)

7、差異;培養(yǎng)不同敏感性的人膀胱癌EJ、T24細(xì)胞系，經(jīng)白藜蘆醇(100μM，48h)持續(xù)處理，處理作用后收集細(xì)胞。應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法、Western-blotting和RT-PCR等方法檢測(cè)白藜蘆醇處理前后ARHI及其發(fā)揮作用途徑中蛋白因子的表達(dá)情況，并進(jìn)行比較與分析。
　　結(jié)果:1)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，在膀胱癌樣本中ARHI表達(dá)陽(yáng)性率為64％(16/25)，陰性率為36％(9/25)，而癌旁相對(duì)正常組織中ARHI得表達(dá)陽(yáng)性率

8、為100％(5/5);其中ARHI在癌組織中均呈陰性(36％)和弱陽(yáng)性(64％)表達(dá)，在癌旁正常組織中均呈弱陽(yáng)性(20％)和強(qiáng)陽(yáng)性(80％)表達(dá)，差異顯著(P＜0.01)。2)經(jīng)白藜蘆醇處理后，在各膀胱癌細(xì)胞系中ARHI表達(dá)水平上升;3)白藜蘆醇處理的EJ及T24細(xì)胞系中p-STAT3表達(dá)下降，且p-STAT3有明顯的核異位;c-myc、VEGF表達(dá)明顯降低。
　　結(jié)論:1)通過(guò)與癌旁相對(duì)正常組織比較，ARHI的表達(dá)水平在膀胱癌組