脊髓JAK2-STAT3信號(hào)通路參與大鼠電針耐受調(diào)節(jié).pdf

1、針灸作為一種傳統(tǒng)療法在治療疾病和緩解疼痛方面具有悠久的歷史。電針(EA)衍生于傳統(tǒng)手針并逐漸替代手針，因?yàn)殡娽樀逆?zhèn)痛效果更佳，副作用少，并且其參數(shù)可被客觀的量化和控制。但是，如同嗎啡耐受一樣，長(zhǎng)時(shí)間或反復(fù)電針刺激會(huì)使鎮(zhèn)痛效果降低甚至消失，學(xué)術(shù)上稱之為“電針耐受”。
　　臨床上電針耐受現(xiàn)象普遍存在，引起學(xué)者們高度關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)電針能通過(guò)誘導(dǎo)內(nèi)源性阿片肽類物質(zhì)釋放產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用，如內(nèi)啡肽和腦啡肽，同時(shí)還可以促進(jìn)一些具有抗鎮(zhèn)痛作用物質(zhì)的釋

2、放，如孤啡肽、八肽膽囊收縮素和血管緊張素Ⅱ等。研究證實(shí)了嗎啡耐受與電針耐受存在雙向交叉耐受，提示二者可能存在共同的作用機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)在嗎啡耐受中，大鼠脊髓的STAT3的磷酸化水平升高。另外大量研究表明JAK2-STAT3信號(hào)通路在神經(jīng)病理性痛大鼠的脊髓背角被激活，對(duì)疼痛發(fā)展和維持有重要作用，抑制JAK2-STAT3信號(hào)通路可以緩解痛覺(jué)觸敏和痛覺(jué)過(guò)敏，提示JAK2-STAT3信號(hào)通路在疼痛反應(yīng)起到重要作用。然而JAK2-STAT3信號(hào)通路

3、是否參與電針耐受還未有報(bào)道。
　　本試驗(yàn)將單次電針后甩尾潛伏期升高超過(guò)50％的SD大鼠判定為有效鼠。將70只有效鼠（250±20g）隨機(jī)分成2組:電針組（EA組）和假針組。通過(guò)反復(fù)電針刺激穴位建立大鼠耐受模型（鎮(zhèn)痛效果顯著降低或消失表明耐受形成）。EA組采用2Hz頻率電針刺激大鼠雙側(cè)足三里和三陰交穴位，每天1次，持續(xù)30min，連續(xù)8d。假針組大鼠只穴位處扎針，不通電，其余處理與電針組相同。通過(guò)熱輻射法測(cè)量大鼠的甩尾潛伏期即痛閾。

4、每次電針前后分別測(cè)量痛閾，計(jì)算痛閾變化率，通過(guò)痛閾變化率評(píng)估電針的鎮(zhèn)痛效果。
　　為探索脊髓JAK2-STAT3信號(hào)通路在電針耐受中的作用，取電針0（電針前）、2、4、6和8d后的大鼠L4～6段脊髓樣品，采用熒光定量PCR檢測(cè)JAK2和STAT3的基因表達(dá)變化，Western Blot檢測(cè)JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平，并用免疫組織化學(xué)確定pJAK2和pSTAT3的分布。
　　通過(guò)鞘內(nèi)注射WP1066（JAK2-STA

5、T3信號(hào)通路抑制劑）進(jìn)一步確定脊髓JAK2-STAT3信號(hào)通路對(duì)電針耐受的影響。另選取45只有效鼠，隨機(jī)分成3組: EA組、EA+二甲基亞砜(DMSO)組和EA+WP1066組，每組15只。DMSO（溶劑）和WP1066分別于電針前注入腰膨大部。電針前后測(cè)量痛閾，計(jì)算痛閾變化率，并采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)電針后脊髓背角JAK2和STAT3磷酸化水平。
　　反復(fù)電針結(jié)果顯示，隨著電針次數(shù)增加鎮(zhèn)痛效果減弱。假針組大鼠的痛閾變化率各時(shí)間點(diǎn)均

6、無(wú)顯著變化(p＞0.05)。EA組大鼠痛閾變化率在1～5d顯著高于假針組(p＜0.05)，6～8d與假針組無(wú)異(p＞0.05)，提示電針耐受形成。熒光定量PCR結(jié)果顯示EA組與假針組JAK2和STAT3在mRNA水平上表達(dá)沒(méi)有差異(p＞0.05)，Western Blot結(jié)果顯示，與假針組相比電針后2～6d pJAK2和pSTAT3表達(dá)顯著升高(p＜0.05)，第4d達(dá)到峰值，第8d與電針前無(wú)顯著差異(p＞0.05)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯

7、示pJAK2和pSTAT3主要在脊髓背角Ⅱ區(qū)表達(dá)有差異，且變化趨勢(shì)與Western Blot結(jié)果相符。
　　鞘內(nèi)注射試驗(yàn)結(jié)果顯示EA組與EA+DMSO組無(wú)顯著性變化(p＞0.05)，且6～8d電針效果基本消失。EA+WP1066組鎮(zhèn)痛效果雖然也隨著電針次數(shù)增加而減弱，但4～8d的電針效果都顯著高于EA組與EA+DMSO組(p＜0.05)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示EA組JAK2和STAT3蛋白磷酸表達(dá)趨勢(shì)與反復(fù)電針實(shí)驗(yàn)一致，2～6d表達(dá)