JAK2-STAT3信號通路與胰腺癌曲古抑菌素A耐藥關(guān)系的初步研究.pdf

1、研究背景：
　　胰腺癌是常見的消化惡性腫瘤之一，也是目前預(yù)后最差的實體性腫瘤。近年來其發(fā)病率國內(nèi)外均有明顯升高，在我國胰腺癌是死亡率第6位的常見惡性腫瘤。目前研究認為，胰腺癌的發(fā)生和發(fā)展是一個多基因參與、多階段發(fā)展的過程，它與眾多基因的表達及相互作用有關(guān)，而這些基因的表達是決定胰腺癌表型多樣性的分子基礎(chǔ)。胰腺癌的治療仍以化療為主，但是大多數(shù)藥物療效不佳且副作用較大，而胰腺癌耐藥的產(chǎn)生是導(dǎo)致胰腺癌化療失敗的主要原因。研究顯示，組蛋白

2、去乙酰化酶抑制劑能夠抑制HDAC的活性，從而可以選擇性地調(diào)控部分腫瘤生長、增殖相關(guān)基因。曲古抑菌素A(Trichostatin A，TSA)作為一種新型的低毒性化療藥物，胰腺癌仍然對其易產(chǎn)生耐藥性。TSA誘導(dǎo)建立胰腺癌耐藥株后，并研究耐藥株中JAK2/STAT3信號通路變化情況，進而對調(diào)控該通路來研究其耐藥機制。本研究意在闡明JAK2/STAT3信號通路在胰腺癌細胞耐藥機制形成中的作用，為腫瘤研究提供新思路。
　　目的：
　

3、　本研究模擬胰腺癌體內(nèi)耐藥機制產(chǎn)生。首先應(yīng)用IL-6誘導(dǎo)激活JAK2/STAT3信號通路情況，其次通過構(gòu)建TSA耐藥人胰腺癌細胞，檢測耐藥株的特性。進而干預(yù)JAK2/STAT3信號通路對耐藥株所產(chǎn)生的影響，檢測JAK2、STAT3、P-STAT3表達情況，并檢測下游基因表達，探討STAT3信號通路與胰腺癌耐藥的相關(guān)性。
　　方法：
　　1.人體標本:免疫組化法檢測病人胰腺癌組織標本中JAK2/STAT3上游細胞因子IL-6的

4、表達情況。
　　2.檢測PANC-1、SW1990、AsPC-1、Patu8988人胰腺癌細胞株中JAK2/STAT3蛋白表達，通過Western bolt方法檢測四種人胰腺癌細胞株中JAK2、STAT3、P-STAT3蛋白的表達含量。
　　3.使用TSA梯度增加濃度方法建立PANC-1-TSA耐藥株，PANC-1、PANC-1-TSA人胰腺癌細胞株在IL-6刺激48小時下來激活JAK2/STAT3通路。提取 PANC-1、

5、PANC-1-TSA蛋白和mRNA，進一步通過Western bolt檢測STAT3和P-STAT3表達的變化，PCR檢測c-Myc、c-Src、HIF1-α、Cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xl的mRNA表達情況。
　　4.應(yīng)用JAK2抑制劑AG490(10μM，30μM，60μM)作用于PANC-1、PANC-1-TSA細胞48小時，CCK-8檢測不同濃度作用下兩種胰腺癌細胞株細胞活力;另外提取PANC-1-TSA的m

6、RNA和蛋白，Western blot檢測STAT3、P-STAT3蛋白表達情況，PCR檢測c-Myc、c-Src、HIF1-α、Cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xl的mRNA表達。
　　結(jié)果：
　　1.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，96例胰腺癌標本中，其中有77例標本存在IL-6蛋白的陽性表達，比例為80.2％。
　　2.在四種不同胰腺癌細胞株中，Western blot結(jié)果顯示在所有細胞株中JAK2和STAT3都存

7、在表達。
　　3.Western blot結(jié)果顯示PANC-1-TSA細胞的STAT3、P-STAT3蛋白表達高于PANC-1細胞，c-Myc、c-Src、HIF1-α、Cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xl的mRNA表達也顯示出明顯差異(P＜0.05)。
　　4.在JAK抑制劑AG490(DMSO，10μM，30μM和60μM)的作用下，CCK-8檢測結(jié)果顯示在24小時和48小時作用下PANC-1-TSA細胞的活力低

8、于PANC-1細胞(P＜0.05)。PANC-1-TSA細胞中STAT3和P-STAT3的表達隨著AG490的濃度增加而減少，c-Myc、c-Src、HIF1-α、Cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xl的mRNA差異(P＜0.05)
　　結(jié)論：
　　1.病人的胰腺癌組織存在著IL-6的高陽性表達，IL-6刺激耐藥與非耐藥株，中顯示IL-6在胰腺癌的JAK2/STAT3信號通路起重要的作用。
　　2.研究正常細胞株