白細(xì)胞介素32α抑制胰腺癌細(xì)胞JAK2-STAT3信號及逆轉(zhuǎn)白細(xì)胞介素6誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)和腫瘤轉(zhuǎn)移.pdf

1、白介素32(IL-32)是一種最新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，它在炎癥性腸病、腫瘤、自身免疫病等疾病中扮演著不同的角色，并且在細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞生長、增強(qiáng)炎癥反應(yīng)以及促進(jìn)血管生成等生理學(xué)過程中發(fā)揮著不同的作用。
　　目的:本研究采用白介素32α(IL-32α)處理兩種胰腺癌細(xì)胞Panc-1和SW1990，評估其對上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)基因以及侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的影響，探討JAK2/STAT3信號通路改變與胰腺癌細(xì)胞的EMT與侵襲轉(zhuǎn)移之間

2、是否存在潛在聯(lián)系。
　　方法:(1)本實(shí)驗(yàn)中我們先采用不同濃度的重組人IL-32α(0ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml)分別處理Panc-1/SW1990兩種細(xì)胞株24 h。采用實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)，免疫印跡(western blot)以及免疫熒光技術(shù)比較不同濃度的IL-32α處理組和對照組之間的EMT相關(guān)標(biāo)志物(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、 Zeb1、Snai

3、l)，侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因(MMP2、MMP7、MMP9)以及JAK2/STAT3信號通路相關(guān)分子(p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3)的mRNA與蛋白的表達(dá)量差異。(2)IL-6(100ng/ml)組，IL-32α(25μg/ml)組以及IL-32α(25μg/ml)+IL-6(100ng/ml)聯(lián)合組分別處理Panc-1/SW1990兩種細(xì)胞株24h，分別采用RT-PCR、western blot檢測E-cadherin

4、、 N-cadherin、 Vimentin、 Zeb1、 Snail、 MMP2、 MMP7、 MMP9、 p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3的mRNA與蛋白的表達(dá)量差異以及倒置顯微鏡觀察IL-6處理組和對照組24后胰腺癌細(xì)胞Panc-1和SW1990的形態(tài)差異。(3)采用劃痕試驗(yàn)檢測IL-32α和IL-6對胰腺癌細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移的影響。探討IL-32α和IL-6對胰腺癌細(xì)胞株的相互作用。
　　結(jié)果:(1)濃度梯度

5、組IL-32α處理Panc-1/SW1990兩種細(xì)胞株24h后，E-cadherin的mRNA與蛋白明顯成劑量依賴性增多(P＜0.05），而N-cadherin、Vimentin、 Zeb1、Snail的mRNA與蛋白則成劑量依賴性減低(P＜0.05)，通路蛋白p-JAK2、JAK2、p-STAT3也成劑量依賴性減低(P＜0.05)，而STAT3則無明顯改變。(2)細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果顯示，N-cadherin、Vimentin分子蛋白

6、表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，且經(jīng)過不同濃度的IL-32α處理24h后，其熒光的強(qiáng)度隨著IL-32α濃度增高而減低。(3)倒置顯微鏡拍照顯示IL-6處理組胰腺癌細(xì)胞Panc-1和SW1990的細(xì)胞形態(tài)明顯變梭并且觸角變多。(4)IL-6(100ng/ml)處理Panc-1/SW1990兩種細(xì)胞株24h后E-cadherin的mRNA與蛋白相比對照組增多(P＜0.05），而N-cadherin、 Vimentin、Zeb1、Snail的mRNA與蛋白相

7、比對照組則降低(P＜0.05）;而IL-32α(25μg/ml)則E-cadherin的mRNA與蛋白減少(P＜0.05)，N-cadherin、Vimentin、Zeb1、Snail的mRNA與蛋白則增多(P＜0.05); IL-6(100ng/ml)聯(lián)合IL-32α(25μg/ml)處理組的E-cadherin的mRNA與蛋白印跡灰度值則高于IL-32α處理組低于IL-6處理組。N-cadherin、Vimentin、Zeb1、Sn

8、ail MMP2、MMP7、MMP9、 p-JAK2、JAK2、p-STAT3、的mRNA表達(dá)量與蛋白印跡灰度值低于IL-32α處理組高于IL-6處理組(P＜0.05)，而STAT3則無明顯改變。(5)劃痕試驗(yàn)結(jié)果示IL-6處理組能明顯增加胰腺癌細(xì)胞Panc-1和SW1990的遷移距離，IL-32α處理組則基本無變化，而IL-6聯(lián)合IL-32α處理組胰腺癌細(xì)胞的遷移距離則明顯低于IL-6單獨(dú)處理組(P＜0.05）。
　　結(jié)論:(1