CITP中T細(xì)胞的活性氧水平及在JAK2-STAT3參與下免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：
　　 1.研究臨床健康人、CITP患者外周血T細(xì)胞中活性氧(ROS)水平。
　　 2.探討CITP患者外周血T淋巴細(xì)胞JAK2/STAT3-mRNA的表達(dá)，分析其在CITP患者和正常人中的差異。
　　 3.探討活性氧與JAK2/STAT3的相關(guān)性。
　　 4.為臨床上治療CITP新藥物和靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.外周血T淋巴細(xì)胞的分離
　　 無(wú)菌采集患者及

2、正常健康人的外周靜脈血5 ml，肝素抗凝放于無(wú)菌玻璃培養(yǎng)皿內(nèi)在37℃下培養(yǎng)30分鐘，去除黏附于玻璃培養(yǎng)皿的單核細(xì)胞，以獲取懸浮的淋巴細(xì)胞。加入0.85％NH4Cl溶液溶解紅細(xì)胞，經(jīng)T細(xì)胞分離富聚柱采用負(fù)篩選法獲得獲純化的T細(xì)胞。加入10％新生牛血漿Hanks液重懸T細(xì)胞，調(diào)整T細(xì)胞濃度至2×106/ml。FITC標(biāo)記的抗CD3單克隆抗體檢測(cè)其純度，臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)其活性。
　　 2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞的活性氧

3、　　 分別取30例CITP患者和健康人的外周血，經(jīng)上述分離純化得T淋巴細(xì)胞后，CITP實(shí)驗(yàn)組和健康對(duì)照組同時(shí)加入熒光探針CM-H2DC-FDA。在37℃下避光保存，在搖床上振搖30min以充分反應(yīng)。采用激發(fā)波長(zhǎng)488nm和發(fā)射波長(zhǎng)520nm的流式細(xì)胞儀檢測(cè)DCF熒光強(qiáng)度。每次監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)即為所得的結(jié)果。
　　 3.外周血T淋巴細(xì)胞JAK2/STAT3mRNA水平的檢測(cè)
　　 選20例CITP患者作為實(shí)驗(yàn)組和20例正常健康人

4、作為對(duì)照組，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法對(duì)T淋巴細(xì)胞JAK3/STAT3-mRNA進(jìn)行定量檢測(cè)，分析JAK2/STAT3-mRNA在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間表達(dá)的差異及JAK2/STAT3-mRNA的表達(dá)與活性氧的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.與正常對(duì)照組相比，CITP患者外周血T細(xì)胞中的ROS含量明顯增高。
　　 2.JAK2/STAT3經(jīng)實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)CITP患者外周血T淋巴細(xì)胞中JAK2/STA

5、T3-mRNA表達(dá)高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 3.CITP患者外周血T淋巴細(xì)胞中，活性氧與JAK2/STAT3-mRNA的表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.CITP患者外周血T細(xì)胞的ROS水平明顯增高，可能參與了CITP的發(fā)生發(fā)展。
　　 2.CITP患者外周血T細(xì)胞中JAK2/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的基因表達(dá)明顯高于健康者，提示JAK2/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)