甘草多糖的結(jié)構(gòu)分析及免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、本文主要以傳統(tǒng)中藥甘草切片為原料,研究甘草多糖的提取工藝,甘草多糖的特性結(jié)構(gòu)分析以及其對(duì)實(shí)驗(yàn)用小鼠免疫能力的調(diào)節(jié)作用。
　　 首先,在實(shí)驗(yàn)原料的選擇上,通過對(duì)常見的幾種甘草原料中,主要活性成分甘草酸和甘草多糖的含有量的比較,確定人工種植3-5年生甘草根小側(cè)枝部位切片甘草酸含量為2.9％,多糖含量達(dá)5.0％,為最佳原料,用于本文的后續(xù)研究。在提取工藝研究中,通過單因素、正交實(shí)驗(yàn)研究,以分析純葡萄糖為參照,以苯酚硫酸法測(cè)定多糖含量,

2、確定最佳提取工藝為90℃水浴,30倍料/液比,0.5 h,提取兩次。
　　 在甘草多糖的純化過程中,用正交實(shí)驗(yàn)方法確定醇沉工藝,為80％乙醇,常溫,12 h。通過比較選擇使多糖組分損失較少的Sevage法,脫除甘草多糖粗提物中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)。脫蛋白后的甘草多糖經(jīng)凍干,所得樣品為不含小分子雜質(zhì)和游離蛋白雜質(zhì)的甘草多糖(為指代清晰,后文稱甘草原多糖)。將甘草原多糖溶于生理鹽水,配制成一定濃度的口服溶液,對(duì)BalB/C小鼠進(jìn)行灌胃,研究

3、其體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)作用。主要選取碳粒廓清實(shí)驗(yàn)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和血清溶血素實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明,甘草原多糖在適宜的劑量水平可以顯著(P<0.01)提高小鼠的非特異性免疫和特異性免疫能力。
　　 將甘草原多糖復(fù)溶于蒸餾水,可溶性多糖經(jīng)DEAE-纖維素、葡聚糖凝膠層析柱分級(jí)分離,得到GPS-1b、GPS-2a、GPS-3a和GPS-4a。將GPS-2a、GPS-3a和GPS-4a用于特性結(jié)構(gòu)分析和活性研究。通過紅外光譜分析,確定其具有多糖特征

4、結(jié)構(gòu)；苯酚硫酸法測(cè)定總糖含量(以分析純葡萄糖計(jì))分別為87.8％,86.8％和82.3％,考馬斯亮蘭法測(cè)定其中結(jié)合蛋白含量分別為1.88％,7.54％和9.89％；氣相色譜法研究其單糖組成,三種多糖均含有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、半乳糖和葡萄糖；β-消去實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)糖鏈與結(jié)合蛋白存在-O-的連接方式。原子力顯微鏡觀察GPS-2a、GPS-3a和GPS-4a的微觀形態(tài),發(fā)現(xiàn)存在明顯不同,分別呈現(xiàn)平面網(wǎng)狀,立體網(wǎng)狀和大小不均一的分散的聚集體形態(tài)。