WNT5A-Ror2通過PKC信號通路下調(diào)CyclinD1的表達(dá)抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖.pdf

1、目的：觀察WNT5A對血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影響，繼而探討WNT5A及其信號通路抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖的作用機制。
　　方法：采用慢病毒載體構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)WNT5A的VSMCs細(xì)胞株。采用MTT，平板克隆以及Edu等方法檢測WNT5A對VSMCs增殖的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測WNT5A對細(xì)胞周期的影響。免疫熒光和免疫共沉淀驗證WNT5A和Ror2的空間共定位以及結(jié)合

2、情況。MTT，平板克隆，Edu以及流式細(xì)胞術(shù)等方法檢測siRNA敲低Ror2對VSMCs增殖。采用Western-blot檢測WNT5A/Ror2/PKC/P53/CyclinD1信號通路等相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1）WNT5A在血清培養(yǎng)條件下的VSMCs中的表達(dá)明顯降低，且呈時間依賴性。過表達(dá)和外源性重組WNT5A抑制VSMCs的增殖。siRNA敲低WNT5A能夠促進(jìn)VSMCs的增殖。
　　2）WNT5A能

3、上調(diào)P53，下調(diào)CyclinD1的表達(dá)進(jìn)而抑制VSMCs細(xì)胞周期G0向G1期的轉(zhuǎn)化。
　　3）WNT5A能上調(diào)受體Ror2的表達(dá)，并且WNT5A與Ror2之間存在空間共定位，并相互結(jié)合。siRNA敲低Ror2后，WNT5A對VSMCs增殖的抑制出現(xiàn)逆轉(zhuǎn)。同時，敲低Ror2后VSMCs周期G0/G1期的比例降低，P53的表達(dá)減少，CyclinD1的表達(dá)增多。
　　4）WNT5A能增加PKC的磷酸化水平，siRNA敲低Ror2后

4、PKC的磷酸化水平降低。采用PKC激動劑PMA處理VSMCs，WNT5A和P53的表達(dá)明顯升高，而CyclinD1則表達(dá)下調(diào)。采用PKC抑制劑GF10923X處理VSMCs，WNT5A和P53的表達(dá)下調(diào)，CyclinD1的表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論：
　　1）WNT5A抑制體外血清培養(yǎng)的VSMCs的增殖。
　　2）WNT5A通過阻滯G0/G1期從而抑制VSMCs增殖，其機制可能與上調(diào)P53和下調(diào)CyclinD1的表達(dá)相關(guān)。<