FAKsiRNA通過(guò)下調(diào)mTERF1、CyclinD1抑制低氧誘導(dǎo)下人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　討論低氧誘導(dǎo)下，F(xiàn)AK能否由mTERF1、CyclinD1信號(hào)通路抑制人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖。
　　方法：
　　將人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行原代，利用人工設(shè)計(jì)、化學(xué)合成的人FAK、mTERF1的siRNA脂質(zhì)體經(jīng)Lipofectamine2000將轉(zhuǎn)入人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中。將細(xì)胞分為常氧（37℃，5％CO2，21%O2）NCsiRNA組、FAKsiRNA組、mTERF1siRNA組，低氧（37℃、5%CO2、5

2、%O2、90%N2）NCsiRNA組、FAKsiRNA組、mTERF1siRNA組。用Realtime-PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)FAKmRNA、mTERF1mRNA、CyclinD1mRNA的水平，Western Blot和FAK、CyclinD1、mTERF1蛋白質(zhì)的表達(dá)，免疫熒光檢測(cè)FAK、CyclinD1蛋白的表達(dá)，CCK8法測(cè)定細(xì)胞增殖能力。
　　結(jié)果：
　　與常氧NCsiRNA組比較，常氧FAKsiRNA組FAKmRNA及

3、蛋白質(zhì)表達(dá)明顯減少（P<0.05），而mTERF1、CyclinD1mRNA及蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異（P>0.05）；與低氧NCsiRNA組比較，低氧FAKsiRNA組FAKmRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)明顯減少（P<0.05），而mTERF1 mRNA和mTERF1蛋白質(zhì)、CyclinD1mRNA和CyclinD1蛋白質(zhì)表達(dá)均減少（P<0.05）；
　　與常氧NCsiRNA組比較,轉(zhuǎn)染mTERF1siRNA后，常氧mTERF1siRNA組mT

4、ERF1mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)明顯減少（P<0.05），而FAK、CyclinD1mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)無(wú)明顯變化（P>0.05）。與低氧NCsiRNA組比較,轉(zhuǎn)染mTERF1siRNA后，低氧mTERF1siRNA組mTERF1mRNA及蛋白表達(dá)明顯減少（P<0.05），低氧下CCND1 mRNA和CCND1蛋白表達(dá)減少（P<0.05），而FAKmRNA及FAK蛋白質(zhì)表達(dá)改變不明顯（P>0.05）。
　　免疫熒光檢測(cè)顯示常氧FAKs

5、iRNA組與常氧 NCsiRNA組相比較，F(xiàn)AK是siRNA熒光表達(dá)下降明顯（P<0.05），CyclinD1的熒光表達(dá)變化不明顯（P>0.05）。低氧下，F(xiàn)AKsiRNA組較NCsiRNA組相比，其FAK熒光表達(dá)明顯下降（P<0.05），CyclinD1的熒光表達(dá)也隨之降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　低氧誘導(dǎo)下，沉默F(xiàn)AK可致人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞mTERF1、CyclinD1表達(dá)減少，且抑制HPASMCs增殖，而沉默