HIMF在低氧誘導(dǎo)的大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖的作用.pdf

1、【目的】：
　　研究低氧促有絲分裂原因子（HIMF）調(diào)節(jié)大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞（PASMCs）增殖影響，并探討Ca2+/PKC/MAPKs和PI3K/Akt/mTOR信號通路在此過程中的作用。
　　【方法】：
　　⑴將原代培養(yǎng)的大鼠PSAMCs隨機(jī)分為對照組和低氧組H3h,H6h,H12h, H24h,H48h后，用熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western blotting分別檢測每組的HIMFmRNA和蛋白表達(dá)變化；

2、　?、茦?gòu)建過表達(dá)HIMF病毒，并用EDU法觀察其對各組PASMCs增殖的影響；
　　⑶過表達(dá)HIMF基因，將PSAMCs隨機(jī)分為正常對照組（A組），空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組（B組）和過表達(dá)HIMF組（C組）。每組都依次單獨(dú)加入EGTA（細(xì)胞外Ca2+螯合劑）、BAPTA-AM（細(xì)胞內(nèi)Ca2+螯合劑）、A23187（Ca2+載體激動劑）、LY294002（PI3K抑制劑），Akt抑制劑檢測各組PASMCs的P-PI3k，P-AktThr308，

3、P-AktSer473，P-mTOR蛋白水平的變化;
　?、冗^表達(dá)HIMF基因，分組同上，每組都依次單獨(dú)加入EGTA（細(xì)胞外Ca2+螯合劑）、BAPTA-AM（細(xì)胞內(nèi)Ca2+螯合劑）、A23187（Ca2+載體激動劑）、staurosporine（PKC抑制劑），檢測各組PASMCs的p-PKC， p-p44/42（Thr202/Tyr204）， p-p38（Thr180/Tyr182）蛋白水平的變化。
　　【結(jié)果】：

4、>　　⑴HIMF mRNA和蛋白在常氧組均少量表達(dá)，在低氧條件下，它們表達(dá)均明顯增加，與對照組比較均有顯著差異(P<0.05)，H6h組時(shí)它們表達(dá)均達(dá)最高水平；
　　⑵ Edu細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：過表達(dá)HIMF組，PASMCs的增殖明顯增加，與正常對照組和空白對照組均有顯著差異(P<0.05)；
　?、桥c正常對照組和空白對照組相比較，過表達(dá)HIMF組，p-PI3k,p-AktThr308,p-AktSer473,p-mTO