FHL1蛋白在香煙煙霧刺激大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖與遷移中的作用.pdf

1、目的:
　　研究香煙煙霧刺激對大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)的增殖及遷移作用;并通過FHL1 siRNA轉(zhuǎn)染沉默F(xiàn)HL1表達(dá)，來研究FHL1在香煙煙霧提取物(CSE)刺激大鼠遠(yuǎn)端PASMCs增殖及遷移中的作用。
　　方法:
　　1.采用膠原酶Ⅰ消化法分離培養(yǎng)PASMCs，并通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)及α-actin細(xì)胞免疫熒光法及細(xì)胞免疫組化法鑒定。
　　2.用負(fù)壓吸引裝置制備CSE原液，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需不同濃度，用DM

2、EM完全培養(yǎng)液稀釋CSE原液。不同濃度CSE刺激PASMCs培養(yǎng)24 h后，用CCK8法檢測細(xì)胞增殖。
　　3.分別采用FHL1 siRNA轉(zhuǎn)染及CSE干預(yù)PASMCs，并根據(jù)不同處理分成6個(gè)實(shí)驗(yàn)組，分別為:空白組，陰性轉(zhuǎn)染組，F(xiàn)HL1 siRNA轉(zhuǎn)染組，CSE組，CSE+陰性轉(zhuǎn)染組及CSE+FHL1 siRNA轉(zhuǎn)染組。
　　4.Rea1-timePCR法檢測FHL1 mRNA的表達(dá)，Western blot法檢測FHL1蛋

3、白，CCK8法檢測細(xì)胞增殖，Transwell法測定細(xì)胞遷移。
　　結(jié)果:
　　1.在倒置顯微鏡下觀察PASMCs形態(tài)呈梭形、三角形等。PASMCs經(jīng)α-actin細(xì)胞免疫熒光法及細(xì)胞免疫組化法鑒定陽性。
　　2.不同濃度的CSE對細(xì)胞增殖影響不同。其中，5％CSE對細(xì)胞增殖的影響最大(P＜0.05）。
　　3.CSE刺激可導(dǎo)致PASMCs增殖、遷移及FHL1蛋白表達(dá)增加(P＜0.01)，但在本實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)F