生存素對缺氧人肺動脈平滑肌細胞凋亡與增殖的影響.pdf

1、缺氧性肺動脈高壓(hypoxic pulmonary hypertension，HPH)是呼吸系統(tǒng)常見疾病，可導(dǎo)致右心衰竭，甚至死亡。迄今為止，HPH發(fā)病機制尚未完全闡釋清楚，肺血管重塑被認(rèn)為是HPH的主要病理特征，而肺動脈平滑肌細胞(pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs)過度增殖和凋亡抑制是肺血管重塑的重要機制。當(dāng)前大多數(shù)治療肺動脈高壓(pulmonary hypertension

2、，PH)的藥物主要集中在擴張肺血管，然而對已經(jīng)發(fā)生肺血管重塑的患者來說，降低肺動脈壓的程度有限，且這種擴血管作用對肺循環(huán)無特異性。因此，如何抑制PASMCs增殖促進其凋亡是目前PH治療的熱點課題。
　　目前關(guān)于腫瘤細胞的過度增殖和凋亡受阻已經(jīng)有了較為詳盡的研究，值得借鑒。生存素(survivin)是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosisproteins，IAP)家族的新成員，是目前發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制蛋白，在人

3、類多種惡性腫瘤細胞中過度表達，具有抑制細胞凋亡和促進細胞增殖的雙重功能。近些年研究結(jié)果顯示，survivin參與PASMCs增殖凋亡失衡形成的肺血管重塑。我們前期的研究結(jié)果表明，survivin在慢性缺氧肺動脈高壓大鼠肺組織中高表達，且主要位于肺內(nèi)小動脈的中膜。但survivin在缺氧人PASMCs(human PASMCs，HPASMCs)中是否表達國內(nèi)外尚未見報道。
　　本研究選用HPASMCs為研究對象，研究suvivin在

4、缺氧HPASMCs中的表達情況及survivin的小分子抑制劑YM155對HPASMCs增殖與凋亡的影響。將HPASMCs進行常氧或缺氧24 h培養(yǎng)并將其分為6組:①常氧對照組（N組）;②24 h缺氧組（H組）;③常氧+YM15510nM組(NY組);④24 h缺氧+YM1551nM組(HY1組);⑤24 h缺氧+YM15510nM組(HY10組);⑥24 h缺氧+YM155100nM組(HY100組)。采用Western Blot的方

5、法檢測HPASMCs survivin蛋白表達，RT-PCR的方法檢測HPASMCs survivin mRNA表達。采用活細胞計數(shù)試劑盒(CCK-8)法檢測HPASMCs增殖，原位末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測HPASMCs凋亡。
　　研究發(fā)現(xiàn)N組未見survivin蛋白(0.016±0.006)和mRNA(1)表達，H組可見survivin蛋白(0.837±0.027)、survivin mRNA(17086±1044)表達。各

6、劑量(1nM、10nM、100nM)YM155干預(yù)組survivin蛋白、survivinmRNA含量分別為0.382±0.041、0.281±0.025、0.021±0.002、8074±2135、5614±709、1382±347，較H組顯著降低（q值分別為20.26、24.77、36.36、8.59、11.14、15，53，均P＜0.05），且在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)濃度依賴性。N組細胞增殖活性（以CCK-8法檢測出的A值表示）和細胞凋亡

7、率分別為0.988±0.071、2.683±1.360，與H組（1.438±0.121、0.612±0.500）比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(q值分別為6.484、3.532，均P＜0.05)。各劑量(1nM、10nM、100nM) YM155干預(yù)組細胞增殖活性和細胞凋亡率分別為1.318±0.067、1.168±0.071、0.845±0.129、5.517±1.711、6.658±1.487、7.972±1.934，與H組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意

8、義（q值分別為2.581、3.980、8.733、6.014、7、413、9.023，均P＜0.05），且在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)濃度依賴性。
　　上述結(jié)果證實survivin在缺氧(2.5％ O2)HPASMCs中表達，而在常氧(21％ O2) HPASMCs中不表達。Survivin的小分子抑制劑YM155可以在基因和蛋白水平下調(diào)缺氧HPAMCs中表達的survivin，且呈現(xiàn)濃度依賴性。YM155抑制缺氧性HPASMCs增殖，促進其