槲皮素對野百合堿誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺中小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、[目的]
　　 1、觀察槲皮素對野百合堿(MCT)誘導(dǎo)的大鼠肺動(dòng)脈高壓的影響。
　　 2、觀察槲皮素對肺動(dòng)脈高壓大鼠肺血管中小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖與凋亡的作用,探討槲皮素降低肺動(dòng)脈壓的可能機(jī)制。
　　 [方法]
　　 成年雄性SD大鼠40只隨機(jī)分為4組:正常對照組(對照組)、MCT誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓組(MCT組)、槲皮素預(yù)防組(預(yù)防組)和槲皮素治療組(治療組),每組10只。MCT組:一次性皮下注射野百合堿(5

2、0mg/kg),再以生理鹽水(2ml/d)每日灌胃一次,共20天。對照組:一次性皮下注射與野百合堿相等容量的生理鹽水,再以生理鹽水(2ml/d)每日灌胃一次,共20天。預(yù)防組:一次性皮下注射野百合堿(50mg/kg),同時(shí)給予槲皮素100mg/(kg.d)每日灌胃一次,共20天。治療組:一次性皮下注射野百合堿(50mg/kg)飼養(yǎng)20天后,以槲皮素100mg/(kg.d)每日灌胃一次,共20天。到達(dá)實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)后,右心導(dǎo)管檢查測定大鼠平均肺

3、動(dòng)脈壓力(meanpulmonary arterial pressure,mPAP);蘇木素-伊紅(HE)染色觀察肺中小動(dòng)脈中膜厚度占血管外徑百分比(MT％)及中膜面積占血管壁總面積的百分比(MA%);免疫組化法觀察并計(jì)算大鼠肺中小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating CellNuclear Antigen,PCNA)和B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B-celllymphoma/leukemia-2,Bcl-2)抗原表達(dá)

4、水平;免疫印跡法(Western Blot)觀察肺中小動(dòng)脈中膜PCNA和Bcl-2蛋白的表達(dá)。
　　 [結(jié)果]
　　 1、mPAP比較:
　　 MCT組大鼠的mPAP與對照組、預(yù)防組、治療組之間比較差異具有顯著性,MCT組大鼠的mPAP顯著高于對照組(P＜0.05)、預(yù)防組(P＜0.05)、治療組(P＜0.05);預(yù)防組大鼠的mPAP與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05);治療組大鼠的mPAP與對照組、預(yù)防組比

5、較差異具有顯著性,治療組大鼠的mPAP高于對照組(P＜0.05)、預(yù)防組(P＜0.05)。
　　 2、HE結(jié)果顯示:
　　 對照組和預(yù)防組大鼠肺中小動(dòng)脈管壁薄,管腔大;MCT組大鼠肺中小動(dòng)脈管壁厚度明顯增加,管腔面積較小;治療組大鼠肺中小動(dòng)脈中膜厚度及中膜面積介于MCT組和對照組之間。
　　 3、圖像分析:
　　 (1)MCT組大鼠的MT%與對照組、預(yù)防組、治療組之間比較差異具有顯著性,MCT組大鼠的MT

6、%顯著高于對照組(P＜0.05)、預(yù)防組(P＜0.05)、治療組(P＜0.05);預(yù)防組大鼠的MT%與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05);治療組大鼠的MT%與對照組、預(yù)防組比較差異具有顯著性,治療組大鼠的MT%高于對照組(P＜0.05)、預(yù)防組(P＜0.05)。
　　 (2)MCT組大鼠的MA%與對照組、預(yù)防組、治療組之間比較差異具有顯著性,MCT組大鼠的MA%顯著高于對照組(P＜0.05)、預(yù)防組(P＜0.05)、治療組(

7、P＜0.05);預(yù)防組大鼠的MA%與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05);治療組大鼠的MA%與對照組、預(yù)防組比較差異具有顯著性,治療組大鼠的MA%高于對照組(P＜0.05)、預(yù)防組(P＜0.05).
　　 4、PCNA增殖度(PCNA%)顯示:
　　 MCT組大鼠肺中小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞PCNA%與對照組、預(yù)防組、治療組之間比較差異具有顯著性,MCT組大鼠的PCNA%顯著高于對照組(P＜0.05)、預(yù)防組(P＜0.05)、

8、治療組(P＜0.05);預(yù)防組大鼠的PCNA%與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05);治療組大鼠的PCNA%與對照組、預(yù)防組比較差異具有顯著性,治療組大鼠的PCNA%高于對照組(P＜0.05)、預(yù)防組(P＜0.05)。
　　 5、Bcl-2凋亡度(Bcl-2%)顯示:
　　 MCT組大鼠肺中小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Bcl-2%與對照組、預(yù)防組、治療組之間比較差異具有顯著性,MCT組大鼠的Bcl-2%高于對照組(P＜0.05)、

9、預(yù)防組(P＜0.05)、治療組(P＜0.05);預(yù)防組大鼠的Bcl-2%與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05);治療組大鼠的Bcl-2%與對照組、預(yù)防組比較差異具有顯著性,治療組大鼠的Bcl-2%低于對照組(P＜0.05)、預(yù)防組(P＜0.05)。
　　 6、Western Blot結(jié)果:
　　 (1)PCNA蛋白表達(dá)顯示:MCT組大鼠肺中小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞PCNA蛋白表達(dá)與對照組、預(yù)防組、治療組之間比較差異具有顯著性,

10、MCT組大鼠的PCNA蛋白表達(dá)顯著高于對照組(P＜0.05)、預(yù)防組(P＜0.05)、治療組(P＜0.05);預(yù)防組大鼠的PCNA蛋白表達(dá)與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05);治療組大鼠的PCNA蛋白表達(dá)與預(yù)防組、對照組比較差異有顯著性,治療組高于預(yù)防組(P＜0.05)和對照組(P＜0.05);。
　　 (2)Bcl-2蛋白表達(dá)顯示:MCT組大鼠肺中小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)與對照組、預(yù)防組、治療組之間比較差異具有顯

11、著性,MCT組大鼠的Bcl-2蛋白表達(dá)高于對照組(P＜0.05)、預(yù)防組(P＜0.05)、治療組(P＜0.0.5);預(yù)防組大鼠的Bcl-2蛋白表達(dá)與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05);治療組大鼠的Bcl-2蛋白表達(dá)與對照組、預(yù)防組比較差異具有顯著性,治療組大鼠的Bcl-2蛋白表達(dá)低于對照組(P＜0.05)、預(yù)防組(P＜0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1、槲皮素對MCT誘導(dǎo)的大鼠肺動(dòng)脈高壓有預(yù)防和治療作用。