伊馬替尼治療慢性粒細胞白血病期間谷濃度與療效的關(guān)系.pdf

1、背景與目的
　　 慢性粒細胞白血病(CML)經(jīng)歷了放療、化療、免疫治療、骨髓移植、分子靶向治療等一系列的治療手段,療效逐漸提高,生存期不斷延長,部分患者能獲得痊愈。其中,分子靶向治療正成為越來越重要的方法。伊馬替尼為苯胺嘧啶衍生物,能特異性阻斷ATP在ABL激酶上的結(jié)合位置,使酪氨酸殘基不能磷酸化,從而抑制BCR-ABL陽性細胞的增殖。
　　 2001年5月經(jīng)FDA批準上市,用于治療慢性粒細胞白血病(CML)慢性期(CP

2、)、加速期(AP)、急變期(BC)。伊馬替尼的出現(xiàn),極大地提高了慢粒的療效。長期隨訪表明,使用伊馬替尼治療的新診斷CML患者,6年無事件生存率(EFS)為83％,總生存率(OS)88％,如僅計算CML相關(guān)死亡則OS為95％。研究表明6個月內(nèi)達到完全細胞遺傳學緩解(CCR)者較易達到分子學緩解,更高劑量的伊馬替尼更易達到細胞遺傳學或分子學緩解。Picard S等的研究提示伊馬替尼的血漿濃度和是否能達到CCR或主要分子學緩解(MMR)相關(guān)。

3、Larson RA等的研究表明伊馬替尼血漿谷濃度高,則CCR、MMR及EFS均提高,伊馬替尼的血漿濃度強烈預示能否達到CCR。Horikoshi A等的研究表明伊馬替尼血漿濃度與劑量成指數(shù)關(guān)系增長。研究表明,初治慢性期CML患者,用高于標準劑量的伊馬替尼可獲得更高的CCR和分子學緩解率,高劑量的伊馬替尼和獲得主要分子學緩解率的增加相關(guān)。因此,有必要監(jiān)測患者的藥物血漿濃度,從而更好地提高療效。
　　 本研究應用伊馬替尼治療CML患

4、者并在觀察其療效的同時,通過檢測其伊馬替尼血漿谷濃度、血清AGP(α1-酸性糖蛋白)水平、骨髓細胞內(nèi)伊馬替尼濃度、骨髓細胞hOCT1(人類有機陽離子轉(zhuǎn)運蛋白1)和ABCB1(三磷酸腺苷結(jié)合盒蛋白B亞家族成員1)基因的mRNA表達水平,研究它們對伊馬替尼療效的影響。
　　 方法
　　 1.伊馬替尼治療慢性粒細胞白血病療效
　　 122例CML患者均為南方醫(yī)院血液科2008年8月至2010年2月間的門診及住院就診的患

5、者,男81例,女41例,中位年齡38(6～76)歲,其中116例為慢性期患者(以從診斷到伊馬替尼開始治療期間的病程12個月為界限,CML慢性早期99例,慢性晚期23例),1例為加速期患者,4例為急性變患者。所有患者經(jīng)臨床表現(xiàn)、血象、骨髓象、細胞遺傳學及融合基因檢查,均符合CML診斷標準。伊馬替尼的中位治療劑量為400(200-800)mg,每日頓服,如劑量為800mg,則分兩次服用。分析其無進展生存率(PFS)時,以服藥6個月時治療反應

6、分為CCR組、PCyR組和無細胞遺傳學緩解(NCR)組。
　　 5年生存分析用壽命表法,應用Kaplan-Meier法分析PFS,log-rank檢驗,率的比較用卡方檢驗,所有數(shù)據(jù)用SPSS 13.0進行統(tǒng)計學處理,以α=0.05為檢驗標準,采用雙側(cè)檢驗。
　　 2.血清α1-酸性糖蛋白在監(jiān)測慢性粒細胞白血病病情變化中的應用價值
　　 112例CML患者均為南方醫(yī)院血液科2008年8月至2010年2月間的門診及住

7、院患者,男72例,女40例,中位年齡39(6～76)歲,其中102例為慢性期患者,4例為加速期患者,6例為急性變患者。所有患者經(jīng)臨床表現(xiàn)、血象、骨髓象、細胞遺傳學及基因檢查,均符合CML診斷標準。按療效分為cCR組、完全血液學緩解(CHR)組和未緩解(NR)組。并設(shè)20例健康人為對照(control)組,男16例,女4例,中位年齡30.5(20～47)歲。其中12例患者在伊馬替尼治療3個月后再次檢測,伊馬替尼的劑量為每日400mg。

8、r>　　 所有檢測對象均采集空腹靜脈血,靜置約半小時,待血液凝固后以3000r/min轉(zhuǎn)速離心10min,然后分離出血清,凍存于-20℃待集中檢測。同時檢驗患者血常規(guī)、肝腎功能、心肌酶譜、C反應蛋白(CRP)。
　　 采用免疫比濁法,檢測在特定蛋白分析儀(BNProspec)上進行。
　　 檢測數(shù)據(jù)以樣本均數(shù)±標準差(x±S)表示,多組間樣本均數(shù)比較用方差分析,采用Dunnett’s T3法做多重比較,治療前后結(jié)果采用

9、配對t檢驗。用SPSS13.0進行統(tǒng)計學處理,以α=0.05為檢驗標準,采用雙側(cè)檢驗。
　　 3.伊馬替尼血漿谷濃度與慢性粒細胞白血病療效
　　 82例CML患者均為南方醫(yī)院血液科2008年8月至2010年2月間的門診及住院患者,男56例,女26例,78例為慢性期,1例為加速期,3例為急性變期,中位年齡39(6～76)歲。伊馬替尼每日頓服,其中位劑量為每日400(200～800)mg,如每日800mg則分2次服。所有患者

10、經(jīng)臨床表現(xiàn)、血象、骨髓象、細胞遺傳學及基因檢查,均符合CML診斷標準。對伊馬替尼劑量同為每日400mg的57例患者按療效分為主要分子學緩解(MMR)組、CCR組、部分細胞遺傳學緩解(PCyR)組以比較其血漿谷濃度的差異。
　　 采集標本時間為當日服藥前半小時,所有檢測對象采集肝素抗凝血5m1。采用高效液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法檢測伊馬替尼濃度,方法的線性范圍為2-10000ng/mL。
　　 檢測數(shù)據(jù)以樣本均數(shù)±標準差(x±S

11、)表示,多組間樣本均數(shù)比較采用單向方差分析(One-Way ANOVA),LSD法檢驗。多變量相關(guān)的兩變量相關(guān)分析采用偏相關(guān)分析法。用SPSS 13.0進行統(tǒng)計學處理,以α=0.05為檢驗標準,采用雙側(cè)檢驗。
　　 4.慢性粒細胞白血病患者骨髓細胞內(nèi)伊馬替尼濃度與療效
　　 28例CML患者均為南方醫(yī)院血液科2009年8月至2010年2月間的門診及住院患者,男17例,女11例,慢性期27例,加速期1例,中位年齡38(15

12、～57)歲,中位病程12(3～99)個月。所有患者經(jīng)臨床表現(xiàn)、血象、骨髓象、細胞遺傳學及基因檢查,均符合CML診斷標準。伊馬替尼的口服劑量為每日400(300-800)mg,每日頓服,如劑量為800mg,則分兩次服用。其中1例800mg,3例600mg,均為復發(fā)耐藥患者。按患者療效分為CCR組、PCyR組、耐藥復發(fā)組。
　　 提取患者骨髓有核細胞,反復凍融兩次,加入不含伊馬替尼的空白血漿1ml,再高速離心后檢測。采用高效液相色譜

13、-質(zhì)譜串聯(lián)法檢測,方法的線性范圍為2-10000 ng/mL。
　　 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù),計量資料呈非正態(tài)分布,用中位數(shù)描述；三組計量資料比較采用多個獨立樣本非參數(shù)檢驗中的Kruskal-Wallis H法檢驗。以α=0.05為檢驗標準,采用雙側(cè)檢驗。
　　 5.慢性粒細胞白血病骨髓細胞hOCT1及ABCB1基因mRNA的表達
　　 36例CML患者均為南方醫(yī)院血液科2009年8月至2010年2

14、月間的門診及住院患者,男23例,女13例,慢性期35例,加速期1例,中位年齡39.5(15～67)歲。所有患者經(jīng)臨床表現(xiàn)、血象、骨髓象、細胞遺傳學及基因檢查,均符合CML診斷標準。按患者療效分為CCR組、PCyR組、耐藥復發(fā)組。提取患者骨髓有核細胞,提取RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,采用taqman探針實時熒光定量PCR法檢測骨髓細胞hOCT1及ABCB1基因mRNA的表達。
　　 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù),計量資料呈非

15、正態(tài)分布,用中位數(shù)描述；三組計量資料比較采用多個獨立樣本非參數(shù)檢驗中的Kruskal-wallis H法檢驗。以α=0.05為檢驗標準,采用雙側(cè)檢驗。
　　 結(jié)論
　　 1.伊馬替尼治療CML療效佳,5年OS為93％。80.33％的患者獲CCR,74.49％的患者在服藥6個月時獲得CCR,5年P(guān)FS為88.20％,6個月獲得PCyR組患者5年P(guān)FS為33.50％,6個月為NCR者5年P(guān)FS為0。
　　 2.NR及

16、CHR組患者AGP水平高于獲得CCR及對照組。復發(fā)或加速急性變期患者AGP水平高于CCR患者。AGP可以作為慢粒治療療效檢測指標之一。
　　 3.CML患者伊馬替尼血漿谷濃度與AGP及服用劑量成正相關(guān),與年齡、身高、體重及體表面積無顯著相關(guān)。伊馬替尼每日劑量為400mg時獲得MMR及CCR組患者的血漿谷濃度高于PCyR組。
　　 4.CCR組患者骨髓細胞內(nèi)伊馬替尼濃度高于耐藥復發(fā)組和PCyR組。
　　 5.CCR