應(yīng)用脫細(xì)胞豬主動(dòng)脈瓣支架體外構(gòu)建組織工程心臟瓣膜的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:目前,國(guó)外的研究已取得一定的進(jìn)展,國(guó)內(nèi)的研究還處于起步階段.該實(shí)驗(yàn)以豬主動(dòng)脈瓣脫細(xì)胞后構(gòu)建組織工程瓣膜支架,探索豬瓣脫細(xì)胞方法,脫細(xì)胞后生物力學(xué)性能,免疫反應(yīng)性的改變;然后將體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞種植在脫細(xì)胞的瓣葉上,觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,探索種植細(xì)胞的適宜條件,進(jìn)而將細(xì)胞種植在脫細(xì)胞的瓣膜支架上構(gòu)建初級(jí)組織工程瓣膜,然后觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,探索種植細(xì)胞的適宜條件.方法:1.脫細(xì)胞的貍主動(dòng)脈瓣葉支架的制備;采用去污劑,核酸酶

2、等對(duì)豬主動(dòng)脈瓣葉進(jìn)行脫細(xì)胞處理;脫細(xì)胞瓣葉和新鮮瓣葉的生物力學(xué)特性測(cè)定,主要進(jìn)行應(yīng)力—應(yīng)變、應(yīng)力—松弛、拉斷實(shí)驗(yàn);脫細(xì)胞豬瓣葉、新鮮瓣葉和常規(guī)戊二醛處理的瓣葉的免疫原性的比較.2.組織工程瓣膜構(gòu)建中細(xì)胞種植的實(shí)驗(yàn)研究;將體外培養(yǎng)的細(xì)胞種植在脫細(xì)胞豬主動(dòng)脈瓣葉支架上:①種植新生牛主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(BAECs):觀察細(xì)胞在瓣葉支架上的生長(zhǎng)方式,細(xì)胞分泌PGI<,2>性能的變化;②種植新生牛主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(SMCs):觀察細(xì)胞在支架上的生

3、長(zhǎng)方式;③首先種植SMCs,然后復(fù)合種植BAECs:觀察細(xì)胞在支架上的生長(zhǎng)方式及內(nèi)皮細(xì)胞分泌PGI<,2>性能的變化.3.初級(jí)組織工程瓣膜的體外構(gòu)建;將帶一部分升主動(dòng)脈的豬主動(dòng)脈瓣進(jìn)行脫細(xì)胞處理,觀察瓣膜和主動(dòng)脈的脫細(xì)胞效果.將BAECs種植在整個(gè)脫細(xì)胞豬瓣上,觀察細(xì)胞在整個(gè)瓣膜支架上的生長(zhǎng)情況;并將SMCs和BAECs復(fù)合種植在瓣膜支架上,觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況.結(jié)論:1.應(yīng)用胰酶、EDTA、1％Triton X-100、RNase和DN

4、ase可以完全去除豬瓣組織中的細(xì)胞,脫細(xì)胞過(guò)程并不影響瓣葉的生物力學(xué)性能,脫細(xì)胞后的瓣葉組織免疫反應(yīng)性比新鮮瓣葉和常規(guī)戊二醛處理的瓣葉明顯降低,這種脫細(xì)胞豬主動(dòng)脈瓣能夠用來(lái)構(gòu)建組織工程心臟瓣膜.2.不同的細(xì)胞種植在脫細(xì)胞瓣葉上有著不同的生長(zhǎng)方式,BAECs單獨(dú)種植在支架上時(shí)呈單層生長(zhǎng);SMCs單獨(dú)種植時(shí)呈多層生長(zhǎng);首次在脫細(xì)胞瓣膜支架上行SMCs和BAECs復(fù)合種植,細(xì)胞在支架上生長(zhǎng)良好,BAECs在SMCs表面形成單層生長(zhǎng).3.SMC