不同方法脫豬主動脈瓣膜細胞的對比研究.pdf

1、心臟瓣膜置換術作為一種治療終術期心臟瓣膜疾病的有效手段廣泛應用于臨床，人工心臟瓣膜伴隨這一術式的開展也經歷了50多年的發(fā)展。隨著人工瓣膜質量的不斷完善，廣大瓣膜病患者的生存質量和壽命得到了極大的改善，但目前臨床上所采用的兩大類人心臟工瓣膜——機械瓣和生物瓣都存在一定缺陷：機械瓣植入后需終生抗凝防止血栓栓塞并發(fā)癥的發(fā)生；異種生物瓣耐久性差，易發(fā)生鈣化、衰敗，而低溫保存的同種瓣膜存在排斥反應，且供體來源困難。并且，現有的人造心臟瓣膜都不具有

2、生物活性，移植后不能隨著機體生長，對于低年齡瓣膜病患者尤其不利。因此，構建一種理想的人工心臟瓣膜成為心臟瓣膜外科研究的重點。 上世紀九十年代創(chuàng)立的組織工程學(Tissue Engineering，TE)為人工心臟瓣膜的研究提供了全新的思路和方法，應用組織工程原理構建人工心臟瓣膜成為心臟瓣膜研究新的方向。組織工程心臟瓣膜(Tissue Engineering Heart valve，TEHV)的基本思路是：將體外培養(yǎng)的自體高濃度功

3、能相關的活細胞種植于天然的或人工合成的可降解支架材料上，并使其牢固黏附、生長，從而構建具有正常瓣膜組織新陳代謝功能的人工心臟瓣膜。跟現有的人工心臟瓣膜比較，組織工程心臟瓣膜具有以下優(yōu)勢：1．組織工程心臟瓣膜的結構與正常心臟瓣膜基本相同，相對于機械瓣有著更好的血流動力學特性。2．組織工程心臟瓣膜內部及表面的細胞成分與正常瓣膜相同且為自體細胞，無免疫原性，無需抗凝。3．組織工程心臟瓣膜有生物活性，能隨機體生長發(fā)育，不易退化、衰敗，耐久性強，

4、可有效避免二次手術。理論上，組織工程心臟瓣膜完全克服了目前臨床所用的兩類人工心臟瓣膜的缺點，具有很好的臨床應用前景。組織工程心臟瓣膜的研究大體包括：種子細胞的來源、瓣膜支架的選材和制備、種子細胞在支架上的種植與TEHV的構建三個方面的內容。瓣膜支架是組織工程心臟瓣膜的基礎，它是細胞黏附的支持臺并決定瓣膜的基本構形和工作方式。支架不僅要提供種子細胞生長的空間和瓣膜組織細胞生成的模板，要求在瓣膜自身細胞基質生成之前提供足夠的機械強度，承受快

5、速血流的沖擊所產生的張力和剪切力，而且決定著移植后與機體適應、結合、修復和替代的效果。可以說，支架的材料選擇和制備是限制組織工程心臟瓣膜能否真正應用于臨床的一個關鍵因素。 異種脫細胞基質材料具有正常瓣膜相似的空間結構和機械性能，而且經過去細胞處理后消除了免疫原性，被認為是一類很有臨床應用前景的瓣膜支架材料。本實驗研究去垢劑法、酶水化法等不同脫細胞方法對豬主動脈瓣膜組織及生物力學性能的影響，探討脫細胞基質瓣膜支架制備的最佳方法。

6、 方法 第一部分：豬主動脈瓣葉脫細胞支架模型的建立。1．健康成年豬宰殺后15分鐘內取出主動脈瓣膜及少量瓣上組織，75％乙醇消毒后無菌條件下剪下瓣葉。2．將上述瓣葉隨機分為5組，分別采用曲拉通(TrixionX-100)、十二烷基硫酸鈉(SDS)、脫氧膽酸(DCA)、胰蛋白酶、核酸酶等的其中一種或幾種試劑進行脫細胞處理。3．經過脫細胞處理的瓣葉放入瓣葉保存液中4℃保存。 第二部分：脫細胞效果評價。1．光鏡、掃描電鏡下觀

7、察上述各組脫細胞瓣葉脫細胞效果及脫細胞基質纖維排列情況；2．測試各組脫細胞瓣葉的厚度、含水量、熱皺縮溫度，與新鮮瓣葉組對照觀察不同方法脫細胞對瓣葉物理性能的影響。3．DNA定量分析各組脫細胞瓣葉的細胞核酸成分殘留情況。 結果 (1)胰酶及去污劑法處理的脫細胞基質對瓣葉的理化性能無明顯影響。 (2)胰酶+曲拉通+EDTA+核酸酶法及胰酶+DCA+EDTA+核酸酶法均可完全去除豬主動脈瓣葉的細胞成分。 (3)