瘦素對主動脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的影響.pdf

1、目的:探討瘦素對主動脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞(valvular interstitial cells，VlCs)表型轉(zhuǎn)化的影響，揭示瘦素在鈣化性主動脈瓣膜病(Calcific Aortic ValveDisease，CAVD)發(fā)生發(fā)展中所扮演的角色。
　　方法:膠原酶消化法分離并培養(yǎng)豬主動脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞，取生長良好的P2-P4代細(xì)胞，采用含不同瘦素濃度的培養(yǎng)基(瘦素含量分別為Ong/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、2

2、00ng/ml、400ng/ml)分別刺激細(xì)胞24h，檢測細(xì)胞裂解液堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase，ALP)活性，以確定最佳刺激濃度;用最佳刺激濃度的瘦素分別干預(yù)細(xì)胞24h、48h、72h，測出ALP活性以確定最佳干預(yù)時間。以最佳的刺激濃度刺激細(xì)胞達(dá)到最佳干預(yù)時間，提取細(xì)胞RNA以及蛋白，通過RT-PCR以及Western blot分別測定成肌標(biāo)志物平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、成骨標(biāo)志物骨橋蛋白(OPN)的表達(dá)情

3、況。
　　結(jié)果:瘦素刺激濃度在50ng/ml、l00ng/ml及200ng/ml時，ALP表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且瘦素濃度為100ng/ml時效果最為明顯;使用瘦素濃度為100ng/ml干預(yù)細(xì)胞24h后所測得ALP值最大，且具有統(tǒng)計學(xué)意義，因此確定100ng/ml為后續(xù)實驗的最佳刺激濃度，24h為最佳干預(yù)時間。RT-PCR結(jié)果實驗組與對照組相比較，OPN mRNA表達(dá)顯著增加(P＜0.05)，而α-SMA mRNA的表