探討HSP90在主動脈夾層過程中對平滑肌表型轉(zhuǎn)化的作用.pdf

1、研究背景及目的:
　　熱休克蛋白(HSPs)作為一種含量極其豐富同時在生物進化過程中高度保守的蛋白質(zhì)家族，當(dāng)細胞內(nèi)環(huán)境紊亂或受到外界刺激時會顯著上調(diào)以增強細胞應(yīng)激能力及適應(yīng)能力。熱休克蛋白90(HSP90)作為HSPs家族中的成員之一，在眾多生理及病理過程中均起到重要的作用，近些年隨著HSP90抑制劑的研究逐步深入，目前以17-AAG為代表藥物的格蘭德霉素衍生物已經(jīng)進入諸多血液病及實體瘤單藥治療Ⅱ期臨床實驗。而HSP90在心血管領(lǐng)

2、域的作用機制也在逐步深入進行，目前已有研究表明，HSP90抑制劑17-AAG對于穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊有一定的作用，相關(guān)的研究也在肺動脈高壓及腹主動脈瘤中看到了一定的成效，但其在主動脈夾層發(fā)生發(fā)展過程中的作用目前尚無報道。
　　主動脈夾層(AD)最為危重的急癥之一，盡管目前的診療水平已有了明顯提升，但因夾層急性破裂而導(dǎo)致的院外死亡率仍居高不下，目前對于主動脈夾層的機制性研究認為，除了彈力纖維的退行性變外，血管平滑肌細胞(VSMCs)

3、生物學(xué)特性的改變是參與大動脈疾病中的重要部分，因此，針對平滑肌細胞的機制研究也正在逐步成為了解大動脈疾病的突破點。
　　本實驗首先旨在明確HSP90在AD疾病發(fā)生發(fā)展中血清及組織的表達水平并推測其是否與平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化存在一定的相關(guān)性，接下來在細胞水平明確HSP90抑制劑是否對VSMCs的表型轉(zhuǎn)化具有影響，同時驗證其對VSMCs生物學(xué)特性的影響，最后在AD的動物模型中應(yīng)用HSP90抑制劑觀察其對疾病的治療效果。
　　方法:

4、
　　收集20例從2014年9月至2015年3月在長海醫(yī)院心血管外科因急性Stanford A型胸主動脈夾層行急診手術(shù)患者的血清及術(shù)中胸主動脈組織，同期選取20例志愿者血清及8例心臟移植供體正常主動脈組織作為對照。液氮標本用于提取組織RNA行定量PCR、提取組織蛋白行Western blot;多聚甲醛固定后的標本行常規(guī)染色及免疫組化染色。
　　膠原酶消化法獲得SD大鼠原代胸主動脈平滑肌細胞，通過PDGF-bb誘導(dǎo)大鼠VSMC

5、s發(fā)生生物學(xué)性狀的改變，用HSP90抑制劑17-DMAG進行干預(yù)，對VSMCs的生物學(xué)功能進行檢測，包括平滑肌細胞表型相關(guān)標志物RNA及蛋白水平的改變、CCK8法測定增殖、平板劃線法測定遷移、流式細胞儀檢測細胞周期及凋亡。
　　選取60只4周齡雄性FVB小鼠，通過β-BAPN喂養(yǎng)聯(lián)合血管緊張素Ⅱ建立主動脈夾層小鼠模型，并利用HSP90抑制劑17-DMAG干預(yù)模型，通過建模成功率及死亡率的比較以期獲得HSP90抑制劑是否能防治主動脈

6、夾層，并對不同組中主動脈組織提取組織蛋白行Western blot;多聚甲醛固定標本行常規(guī)HE染色及彈力纖維染色。
　　結(jié)果:
　　1、大體標本中，主動脈夾層患者主動脈組織中HSP90明顯升高，且表達定為于血管壁中膜層平滑肌細胞，并且推測HSP90的表達升高與平滑肌細胞合成型標志物呈正相關(guān);2、在細胞水平上，HSP90抑制劑17-DMAG能抑制由PDGF-bb誘導(dǎo)的平滑肌細胞的表型轉(zhuǎn)化，同時能抑制由PDGF-bb誘導(dǎo)的平滑肌