AGEs-RAGE在新生大鼠主動(dòng)脈夾層平滑肌表型轉(zhuǎn)化中的作用機(jī)制.pdf

1、背景及目的:胸主動(dòng)脈夾層(Thoracic Aortic Dissection，TAD)是近年來(lái)越來(lái)越多見(jiàn)的一種危急重癥，早期誤診率高，就診科室眾多，包括急診科、心胸外科和血管外科，部分因胸痛就診于呼吸內(nèi)科，甚至心內(nèi)科等。治療方法有傳統(tǒng)胸腹主動(dòng)脈人工血管置換術(shù)以及近年來(lái)開(kāi)展的覆膜支架腔內(nèi)隔絕術(shù)，死亡率及并發(fā)癥的發(fā)生率雖逐年下降，但仍較高，特別是復(fù)雜病例；TAD病因較復(fù)雜，疾病基礎(chǔ)是主動(dòng)脈的血管壁發(fā)生改變，尤其是主動(dòng)脈中層結(jié)構(gòu)的改變最為重

2、要。
　　晚期糖基化終末產(chǎn)物(Advanced Glycation End products，AGEs)是廣泛存在于食物和人體新陳代謝中在非酶條件下發(fā)生蛋白質(zhì)、碳水化合物糖基化反應(yīng)形成的不可逆的終產(chǎn)物，其可和體內(nèi)多種靶向組織或細(xì)胞結(jié)合并產(chǎn)生破壞作用，AGEs的積累和其對(duì)機(jī)體生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)生是通過(guò)其受體RAGE(Receptor for AGE)而達(dá)到，目前已有實(shí)驗(yàn)證據(jù)證明與多種常見(jiàn)疾病有關(guān)，諸如糖尿病、阿爾茨海默病、動(dòng)脈粥樣硬化等

3、。RAGE廣泛存在于人體內(nèi)各個(gè)組織細(xì)胞，包括血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、單核細(xì)胞和周圍神經(jīng)元細(xì)胞等。進(jìn)一步的研究已證實(shí)在糖尿病患者，AGEs可以促進(jìn)動(dòng)脈平滑肌的增殖和表型轉(zhuǎn)化。
　　迄今為止，對(duì)于AGEs-RAGE系統(tǒng)在TAD患者中對(duì)動(dòng)脈平滑肌表型轉(zhuǎn)化作用以及是否與TAD的進(jìn)展存在何種關(guān)系還未見(jiàn)報(bào)道。
　　通過(guò)構(gòu)建新生大鼠胸主動(dòng)脈夾層動(dòng)物模型，研究AGEs及 RAGE在胸主動(dòng)脈夾層中的表達(dá)情況，并在血管平滑肌細(xì)

4、胞（Vascular smooth muscle cells,VSMCs）的表型轉(zhuǎn)化經(jīng)AGEs-RAGE調(diào)控的模型中探討對(duì)TAD的形成及進(jìn)展作用的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　方法:建立新生大鼠胸主動(dòng)脈夾層的動(dòng)物模型，分別取15例模型組胸主動(dòng)脈夾層組織及15例正常大鼠胸主動(dòng)脈組織。ELISA方法檢測(cè)組織樣本中AGEs的表達(dá)水平。并通過(guò)免疫印跡雜交方法檢測(cè)RAGE的表達(dá)情況。
　　對(duì)鼠胸主動(dòng)脈平滑肌應(yīng)用重組血小板源性生長(zhǎng)因子BB（PD

5、GF-BB）刺激及去血清饑餓培養(yǎng)的方法，建立VSMCs表型轉(zhuǎn)化模型；通過(guò)免疫印跡雜交分析VSMCs特異基因平滑肌肌動(dòng)蛋白α(smooth muscle alpha-actin,SMα-actin)和鈣離子結(jié)合蛋白Calponin的表達(dá)變化以驗(yàn)證VSMCs表型轉(zhuǎn)化。ELISA及RT-PCR檢測(cè)AGEs及其受體RAGE的表達(dá)在VSMCs表型轉(zhuǎn)化過(guò)程中的變化。
　　進(jìn)一步對(duì)VSMCs進(jìn)行AGEs刺激干預(yù)實(shí)驗(yàn)，以及通過(guò)siRNA沉默RAG

6、E的表達(dá)，檢測(cè)各組SMa-actin和Calponin的表達(dá)量，對(duì)胸主動(dòng)脈夾層形成過(guò)程中AGEs調(diào)控動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的作用進(jìn)行進(jìn)一步的分析研究。
　　結(jié)果：在新生大鼠胸主動(dòng)脈夾層組織及正常組織中，前者AGEs-RAGE的表達(dá)數(shù)值顯著高于后者（P＜0.01）。PDGF-BB及饑餓培養(yǎng)刺激VSMCs引起VSMCs的表型轉(zhuǎn)化，結(jié)果表明，AGEs及其受體RAGE與SMα-actin和鈣離子結(jié)合蛋白Calponin的表達(dá)量負(fù)相關(guān)。在通