骨髓基質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程心臟瓣膜的初步研究.pdf

1、[背景] 組織工程心臟瓣膜是采用人工合成的材料，制成組織工程心臟瓣膜的支架，通過將體外擴(kuò)增的自體活細(xì)胞種植在瓣膜支架上，細(xì)胞能夠牢固黏附、生長，使其具有正常瓣膜組織的新陳代謝功能，最后應(yīng)用于置換病變的瓣膜，在體發(fā)揮類似于正常瓣膜的功能。從理論上可以完全克服目前所用機(jī)械瓣膜和生物瓣膜的缺點(diǎn)，具有非常重要的臨床運(yùn)用前景。本試驗(yàn)探討體外培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞作為種子細(xì)胞，種植在有P4HB[聚β羥基丁酯]構(gòu)建的心臟瓣膜上，旨在嘗試為TEHV

2、的研究提供合適的種子材料和瓣膜支架材料及增加種子材料與瓣膜支架材料黏附力的方法。 [方法] 1.取年輕健康狗髂前上嵴的骨髓，分離培養(yǎng)出骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，通過HE染色、Mallory染色、Masson染色及免疫組化鑒定為骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(MSC)，取第三代細(xì)胞種植在有P4HB構(gòu)建的心臟瓣膜上，培養(yǎng)兩周后，用掃描電鏡觀察. 2.取6個(gè)規(guī)格相同的有P4HB[聚β羥基丁酯]構(gòu)建的心臟瓣膜，氣體消毒后分別置入不敷12孔板中，每

3、2個(gè)為1組，前兩組分別被Fn及poly-lysine包被，第3組空白對(duì)照。24小時(shí)后分別種植骨髓基質(zhì)干細(xì)胞0.8×105個(gè)，24小時(shí)后在瓣膜背面再分別種植0.25×105個(gè)。2周后分別行MTT檢測(cè)及掃描電鏡檢測(cè)。取不同數(shù)量的MSC，行MTT檢測(cè)，制作不同細(xì)胞個(gè)數(shù)與MTT吸收光度的曲線。 [結(jié)果] 1.培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞染色及免疫組化染色鑒定均支持其為MSC。 2.掃描電鏡下，未種植細(xì)胞的瓣膜呈蜂窩狀，孔徑在89μm

4、～150μm之間，適宜MSC的爬行；種植細(xì)胞后，瓣膜表面有大量MSC黏附，且爬行長入蜂窩狀空徑內(nèi) 3.經(jīng)Fn及poly-lysine包被的MTT吸光度OD值均數(shù)分別為0.12896及0.12033，均明顯高于對(duì)照組0.11254，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Fn組與poly-lysine組相比亦有顯著差異，前者高于后者。 [結(jié)論] MSC和以P4HB為材料的瓣膜支架構(gòu)建TEHV具有可行性.。Fn能有效的促進(jìn)細(xì)胞在生物可降解的組