耐甲氧西林葡萄球菌的耐藥模式和SCCmec分型研究.pdf

1、目的： 葡萄球菌是引起醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原菌，近年來，因其臨床分離率逐年增高，耐藥性日益嚴(yán)重，已成為全球關(guān)注的熱點(diǎn)和焦點(diǎn)問題。本文旨在研究醫(yī)院內(nèi)感染葡萄球菌兒蟬株的臨床分離情況和抗生素耐藥狀況，檢測并分析耐藥譜，為臨床合理使用抗生素提供依據(jù)，并通過mecA基因檢測和SCCmec基因分型，對(duì)耐甲氧西林葡萄球菌的耐藥機(jī)制進(jìn)行深入探討，了解臨床葡萄球菌感染的流行病學(xué)特征，為臨床預(yù)測耐藥菌株的發(fā)展趨勢、抗感染治療以及預(yù)防耐甲氧西林葡萄球

2、菌的爆發(fā)流行提供對(duì)策和依據(jù)。 方法： (1)對(duì)138株分離自天津某兒童醫(yī)院院內(nèi)感染病人的葡萄球菌進(jìn)行菌種鑒定和臨床資料分析。 (2)應(yīng)用微量肉湯稀釋法藥敏板檢測葡萄球菌對(duì)16種常用抗生素的耐藥率，分析耐藥譜；萬古霉素平板篩選實(shí)驗(yàn)篩選出潛在的VISA，通過萬古霉素E實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。 (3)應(yīng)用Nitrocefin平板檢測β-內(nèi)酰胺酶活性，并用同樣的方法檢測經(jīng)0.05μg/ml苯唑西林誘導(dǎo)后的葡萄球菌的β-內(nèi)酰

3、胺酶活性。 (4)采用PCR技術(shù)檢測葡萄球菌的mecA基因攜帶狀況，基因水平上驗(yàn)證MRS。 (5)對(duì)mecA陽性的葡萄球菌菌株采用兩種經(jīng)典的多重PCR快速簡便地進(jìn)行SCCmec基因分型，閘述其多重耐藥產(chǎn)生的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。 結(jié)果： (1)138株葡萄球菌經(jīng)鑒定，分出金黃色葡萄球菌(SA)65株和凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)73株，SA的主要分離自呼吸道痰液標(biāo)本，而CNS主要分離自血液標(biāo)本，兩者的甲氧兩林耐

4、藥率分別為10.8％、80.8％。 (2)CNS對(duì)苯唑西林、紅霉素、慶大霉素、氨芐/舒巴坦、頭孢拉定、環(huán)丙沙星、頭孢吡肟、氨氯青霉素等抗生素的耐藥率均高于SA(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩者除對(duì)萬古霉素敏感外，對(duì)其他常用抗生素都有不同程度的耐藥性。MRCNS對(duì)頭孢拉定、頭孢三嗪、氨氯青霉素、氨芐/舒巴坦、紅霉素等的耐藥率均高于MSCNS(P<0.05)，具有多重耐藥的特點(diǎn)。萬古霉素平板篩選試驗(yàn)和E試驗(yàn)證實(shí)目前尚未出現(xiàn)萬

5、古霉素耐藥株。 (3)經(jīng)0.05μg/ml苯唑西林誘導(dǎo)后，SA的β-內(nèi)酰胺酶檢出率從50.8％提高到89.2％，CNS的β-內(nèi)酰胺酶檢出率從61.6％提高到90.4％，臨床實(shí)驗(yàn)室在檢測β-內(nèi)酰胺酶時(shí)可應(yīng)用苯唑西林誘導(dǎo)以減少假陰性的產(chǎn)生。 (4)mecA基因的檢出率為38％。在7株表型MRSA中，5株證實(shí)帶有mecA；在59株表型MRCNS中，46株(78％)為mecA陽性，13株沒有檢測到mecA(22％的假陽性)；在由

6、表型分組的MSSA中，沒有測到mecA陽性株；14株表型MSCNS中，僅1株mecA陽性(7％假陰性)。 (5)5株mecA陽性的金黃色葡萄球菌中檢測出SCCmecI、III、IVa型各一株，兩株未能分型；47株(64.4％)mecA陽性的凝固酶陰性葡萄球菌中，共分出SCCmecI型和IA型6株，III型和IIIB型10株，IV型9株，V型3株和變異的新型SCCmec類I型4株，類IA型5株，仍有10株未能分型。 結(jié)論：

7、 醫(yī)院內(nèi)感染凝固酶陰性葡萄球菌的多重耐藥率和mecA攜帶率高于金黃色葡萄球菌，需引起臨床足夠的重視，本醫(yī)院尚未發(fā)現(xiàn)萬古霉素耐藥株或中介耐藥株；進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶檢測時(shí)可應(yīng)用苯唑西林誘導(dǎo)以減少假陰性的產(chǎn)生；通過表型判斷MRSA或MRCNS出現(xiàn)假陽性的可能大于出現(xiàn)假陰性的可能，需根據(jù)mecA基因檢測來判斷MRS；半數(shù)以上凝固酶陰性葡萄球菌的SCCmec可用現(xiàn)有多重PCR方法分型，但有兩種新型SCCmec出現(xiàn)，疑為I型變異株，暫定為類I