苜蓿丫紋夜蛾核型多角體病毒新增效蛋白的研究.pdf

1、昆蟲病原病毒具有殺蟲效果專一、持久、無抗藥性，對人、畜及高等植物無害等特點，并且能在害蟲種群中形成流行病而長期控制蟲口，從保持生態(tài)平衡和減小化學農藥對環(huán)境污染戰(zhàn)略考慮，作為生物殺蟲劑的開發(fā)和應用頗具潛力。但病毒殺蟲劑的應用尚存在以下三個問題：一是殺蟲范圍窄，二是作用速度較慢，三是殺蟲效果不夠穩(wěn)定，大大限制了病毒殺蟲劑的大面積生產應用，如何提高病毒殺蟲效果一直是病毒殺蟲劑研究的重要課題之一。 本實驗是將苜蓿丫紋夜蛾核型多角體病毒(

2、AcMNPV)與粘蟲痘病毒(PsEPV)混合侵染三齡末東方粘蟲，發(fā)現AcMNPV能顯著提高PsEPV的致病力。當每頭幼蟲接入1.0×104OBs的AcMNPV和1.0×107OBs的PsEPV的混合液時，幼蟲的死亡率為95.00﹪。而單獨用1.0×107OBs/蟲AcMNPV處理時，則幼蟲不感染；單獨用1.0×107OBs/頭PsEPV處理時，只獲得46.33﹪的死亡率。 將AcMNPV多角體蛋白與病毒粒子分離后進一步測定，發(fā)現

3、單獨用1.0×106OBs/蟲PsEPV侵染三齡東方粘蟲時，幼蟲不被感染，而用同樣濃度再混以AcMNPV多角體蛋白或病毒粒子時，則會有41.67﹪和36.67﹪的死亡率，說明多角體蛋白或是病毒粒子的包涵體蛋白是產生增效作用的重要因子。 為進一步確定AcMNPV對PsEPV增效作用機理，分別用1.0×107OBs/蟲PsEPV、1.0×104OBs/蟲AcMNPV和1.0×107OBs/蟲PsEPV與1.0×104OBs/蟲AcM

4、NPV混合飼喂5齡粘蟲，分別處理30min，8h，36h后，取圍食膜(peritrophicmembrane，PM)，進行SDS-PAGE分析。結果發(fā)現，當單獨飼喂PsEPV30min圍食膜沒有變化；處理8h，106.00kDa和54.20kDa蛋白條帶消失，直到處理36h，圍食膜沒有新變化。而當PsEPV與AcMNPV混合感染時，圍食膜破壞嚴重。處理30min，106.00kDa和54.20kDa蛋白條帶消失；處理8h，170.00k

5、Da，106.00kDa、54.20kDa，51.80kDa和23.65kDa蛋白條帶消失；處理36h，170.00kDa，106.00kDa、54.20kDa、51.80kDa、23.65kDa和21.00kDa蛋白條帶消失。 取健康5齡粘蟲的圍食膜，體外用1.0×104OBsAcMNPV/PM處理，分別于30min，8h，36h后取出圍食膜，SDS-PAGE檢測。結果發(fā)現，體內處理與體外處理結果相似。36h后共有170.00