斜紋夜蛾核型多角體病毒對宿主種群內(nèi)遺傳多態(tài)性的適應(yīng)性研究.pdf

1、寄主遺傳多樣性對于其抵御寄生物感染至關(guān)重要，此已在脊椎動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物中得到一些實(shí)驗(yàn)證實(shí)。核型多角體病毒(NPV)作為昆蟲體內(nèi)寄生物，常在寄主自然種群中侵染流行，是一類重要的害蟲生物防治資源。NPV受宿主遺傳多樣性的影響如何？這方面的研究報(bào)道較少。斜紋夜蛾Spodoptera litura是農(nóng)業(yè)上的重大害蟲，其食量大，食性雜，且分布廣泛，常暴發(fā)成災(zāi)。斜紋夜蛾核型多角體病毒(SpltNPV)是斜紋夜蛾自然種群的重要調(diào)節(jié)因子，已被開發(fā)為生物

2、殺蟲劑。斜紋夜蛾自然種群內(nèi)遺傳多態(tài)性如何？其自然感染的NPV又是如何適應(yīng)宿主遺傳多態(tài)性？這方面的研究不僅有利于闡明寄主和寄生物協(xié)同進(jìn)化策略，同時(shí)也有利于更好地利用NPV進(jìn)行有效的害蟲生物防治。為此，本文研究SpltNPV安徽和縣株的遺傳多態(tài)性，并同時(shí)研究斜紋夜蛾和縣種群內(nèi)的遺傳多態(tài)性，進(jìn)而研究病毒對宿主遺傳多態(tài)性的適應(yīng)性。研究結(jié)果如下:
　　1在中國安徽和縣采集到自然感染病毒的斜紋夜蛾病蟲，從中分離出SpltNPV15個(gè)活體克隆株

3、系。對15個(gè)活體克隆株系基因組DNA分析表明，其EcoRⅠ、HindⅢ和PstⅠ限制性酶切圖譜未有明顯差異。進(jìn)一步擴(kuò)增15個(gè)活體克隆株系的細(xì)胞凋亡抑制（IAP）基因、p49基因、晚期表達(dá)因子lef-4、lef-5、lef-8、lef-11基因和DNA解旋酶基因等基因，發(fā)現(xiàn)其相同基因序列無差異;基因序列比對及系統(tǒng)發(fā)育分析表明，SpltNPV和縣株與已報(bào)道的SpltNPV其它株系的同源性很高，表明SpltNPVIAP宿主域相關(guān)等基因較為保守

4、。研究尚未發(fā)現(xiàn)SpltNPV和縣株內(nèi)有豐富的遺傳多態(tài)性。
　　2從采集于安徽和縣甘藍(lán)上的斜紋夜蛾中隨機(jī)建立了7個(gè)單雌系，并在室內(nèi)連續(xù)飼養(yǎng)。對各單雌系進(jìn)行擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)分析，先利用4對引物進(jìn)行初步篩選，選取擴(kuò)增結(jié)果差異大的3個(gè)單雌系，進(jìn)一步利用36對引物對45頭斜紋夜蛾個(gè)體（每單雌系15頭）分別進(jìn)行擴(kuò)增。共獲得1024個(gè)擴(kuò)增片段，其中多態(tài)性條帶為880條，平均每對引物的擴(kuò)增條帶為28.44條。多態(tài)性比率(PPB)平均

5、為86，Shannon's多樣性指數(shù)平均為0.4663，有效等位基因介于1.3816～1.7344之間。隨后用PopGen32軟件分析，發(fā)現(xiàn)單雌系間的分化系數(shù)(Gst)為0.3203。對3個(gè)單雌系的斜紋夜蛾進(jìn)行遺傳距離的測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)斜紋夜蛾A、B和C3個(gè)單雌系間有一定的遺傳分化，其中B與A或C的遺傳分化更為明顯，遺傳相似系數(shù)均小于0.78。以上結(jié)果表明，斜紋夜蛾和縣種群內(nèi)有一定的遺傳多態(tài)性。
　　3在獲得均來源于中國安徽和縣的有

6、遺傳差異斜紋夜蛾單雌系以及SpltNPV的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究了6個(gè)SpltNPV樣品對有遺傳差異的3個(gè)斜紋夜蛾單雌系致病力差異，發(fā)現(xiàn)病毒對不同單雌系的致病力存在顯著差異，其中對單雌系B的致病力最低，A次之，對C的致病力最高，且各差異在6個(gè)病毒活體克隆株系間均一致。較致病力差異，病毒在不同單雌系間的殺蟲速度差異要小，6個(gè)病毒活體克隆株系中有3個(gè)發(fā)現(xiàn)有殺蟲速度的差異，主要表現(xiàn)為對單雌系B的殺蟲速度顯著低于另兩個(gè)。研究結(jié)果表明NPV可以不同感