兩種甜菜夜蛾核型多角體病毒對(duì)離體細(xì)胞的侵染和增殖特性.pdf

1、甜菜夜蛾核型多角體病毒（Spotoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus, SeMNPV）是一種防治甜菜夜蛾的重要病原微生物，因具有殺蟲專一、殺蟲效果好、對(duì)環(huán)境無污染等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用。本研究對(duì)新分離得到的甜菜夜蛾核型多角體病毒（B種）與甜菜夜蛾核型多角體病毒美國分離株（A種）的生物學(xué)特性進(jìn)行了比較，主要包括BV增殖特性、對(duì)不同細(xì)胞的感染癥狀、感染率、多角體產(chǎn)量以及對(duì)幼蟲毒力等方面，并對(duì)病毒

2、可誘導(dǎo)產(chǎn)生凋亡的Se-1細(xì)胞進(jìn)行了細(xì)胞克隆，其主要結(jié)果如下：
　　1)利用兩種甜菜夜蛾核型多角體病毒感染粉紋夜蛾（Trichoplusia ni）胚胎細(xì)胞系BTI-Tn5B1-4（High Five, H5）和Tn-9-4、草地夜蛾（Spodoptera frugiperda）卵巢細(xì)胞系Sf-9、甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）胚胎細(xì)胞系Se-1、Se-2、Se-3、粘蟲（Mythimna separata）胚胎細(xì)胞

3、系 Ms10-1、蘋果蠹蛾（Cydia pomonella）胚胎細(xì)胞系 Cp-E-11、棉鈴蟲（Helicoverpa armigera）胚胎細(xì)胞系Ha-E-5、華北大黑鰓金龜（Holotrichia oblita）胚胎細(xì)胞系Ho-3、Ho-4、Ho-6、暗黑鰓金龜(Holotrichia parallela)胚胎細(xì)胞系Hp-E-1、Hp-E-21、Hp-E-22等8種昆蟲的15種細(xì)胞系。發(fā)現(xiàn)兩種病毒均對(duì)細(xì)胞系Cp-E-11、Ha-E-

4、5、Ho-3、Ho-4、Ho-6、Hp-E-1、Hp-E-21、Hp-E-22沒有影響，細(xì)胞正常生長，細(xì)胞系H5、Sf-9、Tn-9-4、Se-3則出現(xiàn)典型的病毒感染癥狀，即感染后期細(xì)胞內(nèi)充滿多角體，細(xì)胞系Ms10-1感染后少量細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)多角體，大部分細(xì)胞出現(xiàn)碎裂的現(xiàn)象，細(xì)胞Se-1、Se-2一部分細(xì)胞被感染，一部分細(xì)胞發(fā)生凋亡，兩種病毒引起的細(xì)胞病變情況沒有明顯的差別，二者的寄主范圍相同。
　　2)測定比較了兩種甜菜夜蛾核型多角

5、體病毒A種和B種對(duì)多株敏感細(xì)胞系的感染率以及病毒產(chǎn)量，發(fā)現(xiàn)SeMNPV A種的細(xì)胞感染率和病毒產(chǎn)量均高于SeMNPV B種，且兩種甜菜夜蛾核型多角體病毒對(duì)甜菜夜蛾細(xì)胞系Se-2和Se-3的感染率以及多角體產(chǎn)量具有顯著差異性，SeMNPV A種病毒和SeMNPV B種病毒在Se-2細(xì)胞中感染率分別為93.55％和35.83%，多角體產(chǎn)量分別為1.96×106PIB/mL和6.20×105 PIB/mL；SeMNPV A種病毒和SeMNPV

6、 B種病毒在Se-3細(xì)胞中感染率分別為97.52%和94.11%，多角體產(chǎn)量分別為1.43×106PIB/mL和6.80×105 PIB/mL，對(duì)其他細(xì)胞的細(xì)胞感染率和病毒產(chǎn)量差異均不顯著。兩種病毒對(duì)來源于異源寄主的細(xì)胞系H5、Sf9的感染率和多角體產(chǎn)量均較高，對(duì)同是來源于甜菜夜蛾胚胎組織的細(xì)胞系感染率和病毒產(chǎn)量存在很大差異，而且對(duì)Se-3感染率和多角體產(chǎn)量要遠(yuǎn)高于Se-1和Se-2。
　　3)對(duì)兩種病毒進(jìn)行BV生長曲線測定發(fā)現(xiàn)，

7、兩種病毒的BV增殖過程均為一個(gè)先上升后下降的過程，SeMNPV B種在接種的24h~120h，病毒滴度逐漸增加，接種120h達(dá)到最大值，120h后病毒滴度逐漸下降，SeMNPV A種在接種的24h~96h，病毒滴度逐漸增加，接種96h達(dá)到最大值，96h后病毒滴度逐漸減少，兩種病毒的總趨勢是一致的。
　　4)利用甜菜夜蛾細(xì)胞系Se-3增殖兩種病毒并測定比較兩種病毒對(duì)甜菜夜蛾4齡幼蟲的毒力，結(jié)果表明SeMNPV B種和SeMNPV A

8、種的LC50分別為2.15×105 PIB/mL和1.01×106 PIB/mL，SeMNPV B種的毒力稍高于SeMNPV A，但是二者差異不顯著。
　　5)對(duì)病毒可使其產(chǎn)生凋亡和感染現(xiàn)象的甜菜夜蛾細(xì)胞系Se-1進(jìn)行了克隆，共得到克隆株20株，進(jìn)行RAPD檢測結(jié)果表明，20株細(xì)胞克隆株的擴(kuò)增譜帶均與原始細(xì)胞Se-1相同，表明20株細(xì)胞克隆株均來自于原始細(xì)胞系Se-1。分別對(duì)20株克隆株進(jìn)行凋亡檢測，篩選得到凋亡率高的克隆株Se-