熒光增白劑和增效蛋白對(duì)三種鱗翅目害蟲核型多角體病毒的增效作用.pdf

1、圍食膜(PM)是位于昆蟲中腸細(xì)胞和腸腔之間的一層半透膜，起著保護(hù)中腸上皮細(xì)胞，抵抗微生物入侵的作用，是昆蟲中腸細(xì)胞和腸腔之間的一種防御性屏障。目前，用于害蟲生物防治的昆蟲病毒主要有桿狀病毒科的核型多角體病毒(NPV)和顆粒體病毒(GV)，其中大部分是針對(duì)鱗翅目害蟲的，但由于桿狀病毒殺蟲速度慢，殺蟲譜窄，而限制了推廣使用。熒光增白劑和昆蟲病毒增效蛋白能夠與圍食膜上特異位點(diǎn)結(jié)合，破壞圍食膜結(jié)構(gòu)，促進(jìn)病原微生物對(duì)害蟲的感染。 本文從圍

2、食膜的角度入手，初步研究了兩種增效因子:熒光增白劑FB28和棉鈴蟲顆粒體病毒增效蛋白En-Ha對(duì)三種鱗翅目害蟲核型多角體病毒的增效作用。 1.FB28和En-Ha離體處理三種鱗翅目害蟲的圍食膜，SDS-PAGE分析其圍食膜蛋白條帶的變化，發(fā)現(xiàn)FB28能夠解離大部分圍食膜蛋白至上清中，并隨時(shí)間的延長(zhǎng)解離的量逐漸變大；En-Ha能夠發(fā)揮其金屬蛋白酶活性，降解圍食膜蛋白，在有金屬蛋白酶抑制劑EDTA的存在下，圍食膜蛋白沒(méi)有被降解，同空

3、白對(duì)照組保持一致。 2.FB28和En-Ha活體處理三種鱗翅目害蟲的圍食膜，觀察其形態(tài)學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)喂食含5μl 1％FB28的飼料2h后圍食膜呈藍(lán)色熒光，開(kāi)始破裂，重新食入新鮮飼料后，圍食膜又逐漸恢復(fù)完整；喂食含5μl 9μg/mL，En-Ha的飼料后，6-7h后圍食膜破裂，重新食入新鮮飼料后，圍食膜亦能恢復(fù)完整。兩種增效因子對(duì)圍食膜的破壞作用是短暫的、可恢復(fù)的。 3.FB28和En-Ha活體處理三種鱗翅目害蟲的圍食膜，

4、SDS-PAGE進(jìn)一步分析其圍食膜蛋白條帶的變化，發(fā)現(xiàn)隨著圍食膜的破裂，相應(yīng)條帶的圍食膜蛋白消失，重新食入新鮮飼料后，圍食膜又逐漸恢復(fù)完整，圍食膜蛋白也逐漸恢復(fù)正常。 4.生物測(cè)定FB28和En-Ha對(duì)HaNPV、PuNPV、SeNPV的增效作用，兩種增效因子能夠通過(guò)破壞圍食膜的完整性，顯著降低三種NPV的LC50。 5.生物測(cè)定FB28和En-Ha的對(duì)圍食膜的短暫影響作用，結(jié)果表明，在新鮮飼料上恢復(fù)4h后的死亡率明顯低