抗鼻咽癌單域抗體與硫酸博來霉素偶聯(lián)物抗腫瘤特性的初步研究.pdf

1、目的:對抗鼻咽癌噬菌體單域抗體HNSA039特異性進行鑒定,構(gòu)建、表達抗鼻咽癌單域抗體HNSA039和大腸桿菌硫氧還蛋白(TrxA)融合蛋白,并對融合蛋白與硫酸博來霉素(BLM)偶聯(lián)物的靶向抗腫瘤特性進行初步研究。
　　 方法:利用鼻咽癌細胞系和非鼻咽癌細胞系對單域抗體HNSA039的特異性進行免疫細胞化學鑒定。構(gòu)建單域抗體HNSA039與大腸桿菌硫氧還蛋白(TrxA)融合基因的原核表達載體pET-21a(+)/TrxA-HNS

2、A039,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),進行IPTG誘導表達。在變性條件下純化融合蛋白。TrxA-HNSA039,進行SDS-PAGE電泳鑒定和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測融合蛋白的免疫活性。以葡聚糖T40為中介體偶聯(lián)融合蛋白TrxA-HNSA039與BLM,利用流式細胞周期分析、MTT、克隆形成實驗檢測其對鼻咽癌細胞系(CNE2)和人肺癌細胞系(A549)的抗腫瘤效應。
　　 結(jié)果:通過對噬菌體重鏈單域抗體HNSA039

3、的免疫細胞化學鑒定,發(fā)現(xiàn)單域抗體HNSA039與CNE2呈較強陽性反應,而與其它人腫瘤細胞系和正常細胞系反應呈弱陽性或不反應。成功構(gòu)建的重組表達載體pET-21a(+)/TrxA-HNSA039,經(jīng)IPTG誘導后表達形式分析顯示,融合蛋白主要以包涵體的形式存在,SDS-PAGE電泳顯示分子量大約為23KD;ELISA結(jié)果顯示融合蛋白與CNE2具有較好的結(jié)合活性。通過流式細胞周期分析、MTT、克隆形成實驗檢測TrxA-HNSA039與硫酸

4、博來霉素偶聯(lián)物(TrxA-HNSA039-BLM)的抗腫瘤活性,結(jié)果顯示偶聯(lián)物的抗腫瘤活性比抗體藥物混合物抗腫瘤活性顯著下降,差別有統(tǒng)計學意義,而對靶細胞系(CNE2)和人肺癌細胞系(A549)抗腫瘤活性差別沒有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論:免疫細胞化學結(jié)果顯示單域抗體HNSA039具有較好的鼻咽癌細胞特異性。成功構(gòu)建TrxA-HNSA039的原核表達載體,然后表達并純化TrxA-HNSA039融合蛋白。ELISA實驗結(jié)果顯示,融合