鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞及其表面標(biāo)志物的初步研究.pdf

1、本文研究鼻咽癌中存有腫瘤干細(xì)胞的可能性，初步探討鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞的表面標(biāo)志物，為針對(duì)殺滅腫瘤干細(xì)胞的治療方法在鼻咽癌臨床治療中的應(yīng)用提供依據(jù)。 [方法] 采用免疫組化SP法檢測(cè)19例鼻咽粘膜慢性炎、33例鼻咽癌和28例鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中E-cadherin、CD44H以及β-catenin的表達(dá)，檢測(cè)各指標(biāo)在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)及其差異；采用原位雜交方法檢測(cè)EB病毒小分子RNAEBERs在鼻咽癌、鼻咽癌癌

2、旁組織中的表達(dá)；體外培養(yǎng)人低分化鼻咽癌細(xì)胞系CNE-2Z，平板克隆形成率實(shí)驗(yàn)觀察CNE-2Z細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的情況；原代培養(yǎng)鼻咽癌組織，觀察鼻咽癌細(xì)胞在體外生長(zhǎng)增殖能力，采用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)鼻咽癌原代細(xì)胞以及CNE-2Z細(xì)胞中E-cadherin、CD44H以及β-catenin的表達(dá)；復(fù)制CNE-2Z裸鼠移植瘤模型，采用免疫組化SP法觀察以上指標(biāo)在移植瘤組織中的表達(dá)情況；采用原位雜交方法檢測(cè)EBERs在CNE-2Z細(xì)胞及其裸鼠移植瘤組織中

3、的表達(dá)；通過對(duì)比各個(gè)指標(biāo)在鼻咽癌組織、鼻咽癌原代細(xì)胞、人低分化鼻咽癌細(xì)胞系CNE-2Z以及裸鼠移植瘤組織中的表達(dá)情況，初步探討各指標(biāo)在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用以及能否成為鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞的表面標(biāo)志物。 [結(jié)果] (1)臨床標(biāo)本免疫組化結(jié)果：E-cadherin和CD44H在鼻咽粘膜慢性炎中的陽性率分別為100％(19/19)和10.52％(2/19)，在鼻咽癌中的陽性率分別為54.54％(18/33)和75.76％(25/

4、33)，在鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的陽性率分別為25.00％(7/28)和96.43％(27/28)；β-catenin在鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽癌和鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中異常表達(dá)率分別為為10.53％(2/19)、48.48％(16/33)和78.56％(22/28)；E-cadherin、CD44H在鼻咽癌中的表達(dá)與鼻咽粘膜慢性炎組以及鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較差異均有極顯著性(P＜0.001)；β-catenin在鼻咽癌中的異常表達(dá)與鼻咽粘膜慢

5、性炎組及鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較差異均有顯著性(P＜0.05)；E-cadherin表達(dá)缺失與β-catenin異常表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.55，P=0.006)。 (2)臨床標(biāo)本原位雜交結(jié)果：EBERs在38例鼻咽癌癌旁組織中陽性率為0％(0/38)，在鼻咽癌中陽性率為84.21％(32/38)，差異有極顯著性(P＜0.001)。 (3)CNE-2Z細(xì)胞有著極強(qiáng)的克隆形成和成瘤能力，其平板克隆形成率為(71.88±4.52

6、)％，裸鼠移植瘤成功率為100％；在33例鼻咽癌中，E-cadherin、CD44H和β-catenin均為異質(zhì)性表達(dá)；在CNE-2Z中，E-cadherin為異質(zhì)性表達(dá)，而CD44H和β-catenin陽性表達(dá)率均為100％，呈同質(zhì)性表達(dá)；在裸鼠移植瘤組織中三者亦均為異質(zhì)性表達(dá)；EBERs在CNE-2Z細(xì)胞及其裸鼠移植瘤組織中均為陰性表達(dá)。 (4)鼻咽癌原代培養(yǎng)結(jié)果：采用組織塊培養(yǎng)法對(duì)15例鼻咽癌新鮮組織進(jìn)行原代培養(yǎng)，14例有

7、癌細(xì)胞長(zhǎng)出，隨著培養(yǎng)時(shí)間的推移，細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，最后僅剩余極少量細(xì)胞存活，其中5例癌細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶壁，對(duì)其消化傳代后，癌細(xì)胞逐漸死亡，一例可見一個(gè)克隆形成。本實(shí)驗(yàn)初步表明鼻咽癌中除了一小部分細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞不能在體外長(zhǎng)期存活生長(zhǎng)，這一小部分細(xì)胞可能對(duì)鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展有著及其重要的作用。 [結(jié)論] (1)CD44H呈高表達(dá)，E-cadherin為低表達(dá)，β-catenin膜表達(dá)減弱或缺失，胞漿/核表達(dá)增多。CD44H高表

8、達(dá)、β-catenin異常表達(dá)及E-cadherin的低表達(dá)可能對(duì)鼻咽癌的生長(zhǎng)、增殖和轉(zhuǎn)移起著重要的調(diào)控作用。β-catenin異常表達(dá)可能與E-cadherin表達(dá)缺失有關(guān)。 (2)EB病毒小分子RNA(EBERs)在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，但并不是鼻咽癌發(fā)生的必須條件。 (3)原代培養(yǎng)表明鼻咽癌中存在腫瘤干細(xì)胞，這部分細(xì)胞可能對(duì)鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展起著重要的作用。 (4)平板克隆形成率、裸鼠移植和免疫